定量pcr定量PCR如何做？

实时定量PCR的结果分析

Sybergreen可以和所有核酸结合，没有特异性。

所以要保证特异性的话，最好用其他的方法。

扩增体系中加入模板DNA的体积，比如同时10微升的体系，对照组加1微升DNA，实验组加2微升DNA，则实验组的加样量是对照组的2倍。

看CT值是分析荧光定量PCR最直观的一个数据，CT值一般在35左右就失去参考价值了，平时我们实验室用BIODAI-PCR荧光定量法测得的扩增曲线的起跳值基本在30左右

实时荧光定量PCR与普通PCR的区别是什么？结果有何异同？能说明的问题是什么？

二者结果相同。

都能说明生物体外的特殊DNA复制的整个过程的扩增效率和溶解温度情况。

区别： 1、二者系统组成不同 荧光定量PCR仪比普通的PCR仪多了荧光信号采集系统和计算机分析处理系统。

2、二者原理不同 荧光定量PCR实时监测与DNA结合的荧光染料激发的荧光，普通OCR通过检测插入DNA中核算染料的量来测定PCR最终产物量。

3、二者反应要求不同 荧光定量PCR对扩增片段有较高的要求，一般为100-300bp，普通PCR可以扩增长点的片段。

4、二者应用不同 荧光定量PCR主要是用来定量分析和确定基因转录水平的，普通的PCR仪是做定性分析和扩增基因片段，定量PCR仪可以做普通PCR仪的工作，反之不行。

5、二者测量成本不同 定量PCR仪价格较为昂贵，普通的基因扩增仪(PCR仪)只能够定性地分析是否存在目标片段。

但是价格要低很多，而且运行成本也要低很多。

实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限，实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度，并记录在电脑软件之中，通过对每个样品Ct值的计算，根据标准曲线获得定量结果。

参考资料来源：百度百科-实时荧光定量PCR 参考资料来源：百度百科-PCR

定量PCR如何做？

首先 你要明白定量PCR的原理 还有就是决定用绝对定量还是相定量，用SBRY还是Taqman 方法 然后就是设计引物 按照步骤 提取RNA 反转录cDNA 上定量 基本上就这样吧 参考资料 /view/349506.htm 还不错 多看些关于这方面的参考文献