定量pcr定量PCR如何做?

定量pcr  时间:2021-06-16  阅读:()

实时定量PCR的结果分析

Sybergreen可以和所有核酸结合,没有特异性。

所以要保证特异性的话,最好用其他的方法。

扩增体系中加入模板DNA的体积,比如同时10微升的体系,对照组加1微升DNA,实验组加2微升DNA,则实验组的加样量是对照组的2倍。

看CT值是分析荧光定量PCR最直观的一个数据,CT值一般在35左右就失去参考价值了,平时我们实验室用BIODAI-PCR荧光定量法测得的扩增曲线的起跳值基本在30左右

实时荧光定量PCR与普通PCR的区别是什么?结果有何异同?能说明的问题是什么?

二者结果相同。

都能说明生物体外的特殊DNA复制的整个过程的扩增效率和溶解温度情况。

区别: 1、二者系统组成不同 荧光定量PCR仪比普通的PCR仪多了荧光信号采集系统和计算机分析处理系统。

2、二者原理不同 荧光定量PCR实时监测与DNA结合的荧光染料激发的荧光,普通OCR通过检测插入DNA中核算染料的量来测定PCR最终产物量。

3、二者反应要求不同 荧光定量PCR对扩增片段有较高的要求,一般为100-300bp,普通PCR可以扩增长点的片段。

4、二者应用不同 荧光定量PCR主要是用来定量分析和确定基因转录水平的,普通的PCR仪是做定性分析和扩增基因片段,定量PCR仪可以做普通PCR仪的工作,反之不行。

5、二者测量成本不同 定量PCR仪价格较为昂贵,普通的基因扩增仪(PCR仪)只能够定性地分析是否存在目标片段。

但是价格要低很多,而且运行成本也要低很多。

实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品Ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。

参考资料来源:百度百科-实时荧光定量PCR 参考资料来源:百度百科-PCR

定量PCR如何做?

首先 你要明白定量PCR的原理 还有就是决定用绝对定量还是相定量,用SBRY还是Taqman 方法 然后就是设计引物 按照步骤 提取RNA 反转录cDNA 上定量 基本上就这样吧 参考资料 /view/349506.htm 还不错 多看些关于这方面的参考文献

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