多糖火箭签约塞弗洛沙

中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第6期2008年6月·853·夏枯草一泊洛沙姆温敏凝胶中多糖的测定姜玲海1,冯怡p,沈岚1,徐德生2(1.
上海中医药大学,上海201203;2.
上海中医药大学附属曙光医院,上海200021)摘要:目的研究去除泊洛沙姆对温敏凝胶中多糖测定干扰的方法.
并建立制剂中多糖的测定方法.
方法采用凝胶冷冻干燥,醋酸乙酯萃取的前处理方法,并以比色法检测制剂中多糖.
结果凝胶经醋酸乙酯萃取后可完全去除基质的干扰,多糖保留率为100.
11%(以=3),比色法检测制剂中多糖的量,平均加样回收率为102.
57%(n一9).
结论该前处理方法简便,可操作性强,基质干扰去除完全,多糖保留率高,含量测定方法稳定、重现性较好.
关键词:夏枯草温敏凝胶;泊洛沙姆;多糖·中图分类号:R286.
1文献标识码:A文章编号:0253—2670(2008)06—0853—03夏枯草为唇形科植物夏枯草PrunellavulgrarisL.
的干燥果穗,有清火,明目,散结,消肿的功效n].
文献及前期研究表明夏枯草中所含多糖具抗病毒及提高免疫等作用[23.
在分离纯化得到夏枯草多糖抗病毒有效部位的基础上,本课题组以泊洛沙姆为基质制备了夏枯草多糖温敏凝胶,但在制剂质量标准研究中发现,泊洛沙姆对多糖的测定造成严重干扰,因此寻找一种理想的前处理方法既可去除基质的干扰又可减少多糖的损失显得尤为重要.
因此本实验通过采用凝胶冷冻干燥后醋酸乙酯萃取处理,很好地控制了基质干扰,建立了简便、稳定、操作性强的温敏凝胶中多糖的测定方法,为以泊洛沙姆为主要基质的含多糖制剂中多糖的测定提供参考.
1试剂与仪器HP8453可见紫外分光光度计(美国Agilent公司);ALPHAl—4冷冻干燥仪(MarenChrist);LXJ—IIB低速大容量多管离心机(上海安亭科学仪器厂);泊洛沙姆407(Poloxamer407,Pluronic@F127,F127,德国BASF,简称P407);泊洛沙姆188(Poloxamer188,Pluronic@F68,F68,德国BASF,简称P188);试剂均为分析纯;夏枯草多糖(自制,质量分数为50%~60%);夏枯草多糖温敏凝胶(自制).
2方法与结果2.
1检测波长的确定:取无水葡萄糖对照品适量,精密称定,加蒸馏水制成2.
10mg/mL无水葡萄糖的溶液,摇匀,即得母液.
取夏枯草多糖冷冻干燥品适量,精密称定,置10mL量瓶中,加蒸馏水使溶解并稀释至刻度,摇匀,精密吸取2.
0mL,置5mL量瓶中,加蒸馏水稀释至刻度,摇匀,即得0.
4mg/mL夏枯草多糖供试品溶液.
精密吸取对照品、供试品溶液各0.
2mL,分别于冰浴中加入5%苯酚0.
8mL,涡旋混匀,再加浓硫酸4.
0mL,加塞,涡旋混匀,于沸水浴中加热10min,取出,于冰水浴中冷却,放至室温.
以溶剂为空白,于400~800nm全波长扫描,结果见图1.
无水葡萄糖对照品、夏枯草多糖在483nm处均有最大吸收.
故选择483am作为多糖的检测波长.
0.
80.
6、0.
40.
20400440480520560600Mnm图1夏枯草多糖和无水葡萄糖的全波长扫描图谱Fig.
1Scanningpatternoffullwavelengthforpolysac-charidesinP.
vulgarisandanhydrousdextrose2.
2标准曲线的制备:分别自母液中精密吸取0.
05、0.
15、0.
25、0.
50、1.
0mL,置5mL量瓶中,加蒸馏水稀释至刻度,摇匀,即得质量浓度分别为20.
15、60.
44、100.
70、201.
50、403.
00/Jg/mL无水葡萄糖对照品溶液.
精密吸取0.
2mL于具塞试管中,分别于冰浴中加入5%苯酚0.
8mL,涡旋混匀,再加浓硫酸4.
0mL,加塞,涡旋混匀,于沸水浴中加热10rain,取出,于冰水浴中冷却,放至室温,以溶剂为空白,于483nm测定吸光度.
以吸光度为横坐标,质量浓度为纵坐标,绘制标准曲线,其回归方程为:C=0.
3634A一0.
0171,r一---0.
9996,线性范围为20.
15~403.
00/19/mL.
2.
3凝胶中泊洛沙姆对多糖测定的干扰及处理收稿日期:2007—09—18基金项目:上海市科委中药现代化专项(03DZl9521)作者简介:姜玲海(I982一).
女,上海人,硕士.
研究方向:药物新剂型、新技术.
E—mail:jIh0129@163.
com*通讯作者冯怡Tel:(021)51322493Fax:(021)51322491E-mail:fyi@vip.
sina.
tom·854·中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第6期2008年6月2.
3.
1泊洛沙姆的对多糖测定的影响:取少量P407、P188,分别溶胀后,自2.
1检测波长的确定项下"于冰浴中加入5%苯酚0.
8mL"起操作,于400-一800nm全波长扫描,结果见图2.
P407、P188在多糖最大吸收波长483nm处均有吸收,对多糖的测定存在严重干扰.
2.
3.
2泊洛沙姆干扰的去除:预试验中发现泊洛沙姆在室温下易溶于醋酸乙酯,而夏枯草多糖则不溶,同时又发现以醋酸乙酯对凝胶进行液液萃取时,极易发生胶凝,此胶凝现象降低了醋酸乙酯萃取率,故液液萃取并不适合温敏凝胶中基质与多糖的分离,因此考虑先将凝胶进行冷冻干燥后,再用醋酸乙酯萃取的方法分离基质与多糖.
取温敏凝胶空白基质(P407/P188)约1g,置10mL塑料离心管中,精密称定,冷冻干燥.
冷冻干燥样品加醋酸乙酯2.
0mL,涡旋使完全溶解,5000r/min离心20min,弃上清液,沉淀再加醋酸乙酯2.
0mL,同法萃取1次,沉淀于50℃水浴挥尽醋酸乙酯.
残渣用0.
2mL蒸馏水完全溶解,自2.
1检测波长的确定项下"于冰浴中加入5%苯酚0.
8mL"起操作,于400"--800am全波长扫描,结果见图2.
泊洛沙姆经醋酸乙酯萃取后,在多糖最大吸收波长483ilm处均无吸收,对多糖的测定无干扰.
4uu450,oU,,U6uUOSUMnm圈2泊洛沙姆经醋酸乙酯萃取前后全波长扫描图谱Fig.
2ScanningpattenoffullwavelengthforextractedorunextactedPoloxamerbyethylacetate2.
4醋酸乙酯萃取夏枯草多糖保留率的考察:从夏枯草温敏凝胶中取约1g凝胶,置10mL塑料离心管中,精密称定,冷冻干燥.
冷冻干燥样品加醋酸乙酯2.
0mL,涡旋使完全溶解,5000r/min离心20rain,弃上清液,沉淀分别再加醋酸乙酯2.
0mL,同法萃取1次,沉淀于50℃水浴挥尽醋酸乙酯.
残渣用蒸馏水完全溶解,转移至100mL量瓶,加蒸馏水至刻度,摇匀,即得供试品溶液1.
取夏枯草多糖0.
03g,精密称定,置10mL量瓶中,加蒸馏水溶解并稀释至刻度,摇匀,自此溶液中精密移取1.
0mL,置10mL量瓶中,加蒸馏水稀释至刻度,摇匀,即得供试品溶液2.
分别自供试品溶液l、2中精密移取0.
2mL于具塞试管中,于483am处进行比色,结果多糖保留率的均值为100.
11%,RSD为3.
22%(以=3).
结果表明,凝胶经醋酸乙酯萃取,夏枯草多糖并无损失,醋酸乙酯是样品处理的合适溶剂.
2.
5醋酸乙酯萃取用量的考察:取夏枯草温敏凝胶约1g,置i0mL塑料离心管中,精密称定,冷冻干燥.
冷冻干燥样品分别加醋酸乙酯1.
0、2.
0、3.
0、5.
0mL,涡旋使完全溶解,5000r/min离心20rain,弃上清液,沉淀分别再加醋酸乙酯1.
0、2.
0、3.
0、5.
0mL,同法萃取2次,沉淀50℃水浴挥尽醋酸乙酯.
残渣用蒸馏水完全溶解,转移至100mL量瓶,加蒸馏水至刻度,摇匀,即得供试品溶液.
分别自各供试品溶液中精密移取0.
2mL于具塞试管中,于483nm处测定吸光度值,结果见表1.
醋酸乙酯萃取用量为2.
0mI.
时,制剂中多糖保留率最高,为99.
7%.
故选择醋酸乙酯萃取用量为2.
0mL.
裹1醋酸乙酯用量对萃取制剂中多糖保留率的影响(肛一4)Table1Retentionrateofpolysaccharidesinthermosensi—tivegelofP-vulgarisextractedbyethylacetatewithdifferentquantityies(席=4)醋酸乙酯用量/mL多糖保留率/%1.
O2.
O3.
O4.
O2.
6醋酸乙酯萃取次数的考察:供试品按2.
5醋酸乙酯萃取用量的考察项下方法操作,醋酸乙酯分别萃取1、2、3、4次,结果见表2.
醋酸乙酯萃取次数对制剂中多糖保留率影响不大,且多糖保留率均较高,为简化实验步骤并保证基质去除完全,实验中采用醋酸乙酯萃取2次处理样品.
表2醋酸乙醋萃取次数对制剂中多糖保留率的影响(一=4)Table2Retentionrateofpolysaccharidesinthermo—sensitivegelofP.
vulgarisextractedbyethylacetatewithdifferentextractingtimes(辟=4)醋酸乙酯萃取次数/次多糖保留率/%2.
7方法学考察2.
7.
1稳定性试验:供试品溶液分别于0.
0、0.
5、1.
0、1.
5、2.
0、2.
5、3.
0、3.
5、4.
0h于483am波长处测定吸光度值,结果样品显色后至少4h内,吸光度值基本稳定(RSD为0.
26%).
中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第6期2008年6月·855·2.
7.
2精密度试验:取同一质量浓度的葡萄糖对照品溶液连续测定5次,测定吸光度值,计算,结果吸光度值的RSD为0.
23%.
2.
7.
3重现性试验:取同一批次样品5份,制备供试品溶液,测定,计算,结果样品中多糖质量分数的RSD为2.
3%.
2.
7.
4加样回收率试验:取夏枯草温敏凝胶0.
5g(含多糖约5.
2mg),精密称定,分别加入3.
98、5.
01、6.
04mg无水葡萄糖对照品,制备供试品溶液,测定,计算回收率,结果平均加样回收率为102.
57%,RSD为1.
79%(咒=9).
2.
8温敏凝胶中多糖的测定:分别自3批夏枯草温敏凝胶中取约1g凝胶,置10mL塑料离心管中,精密称定,冷冻干燥.
冷冻干燥样品加醋酸乙酯2.
0mL,涡旋使完全溶解,5000r/min离心20min,弃上清液,沉淀分别再加醋酸乙酯2.
0mL,同法萃取1次,沉淀于50℃水浴挥尽醋酸乙酯.
残渣用蒸馏水完全溶解,转移至100mL量瓶,加蒸馏水至刻度,摇匀,即得供试品溶液.
自供试品溶液中精密移取0.
2mL于具塞试管中,于483nm处测定吸光度值,结果见表3.
表3夏枯草温敏凝胶中多糖的测定结果(万一3)Table3Determinationofpolysaccharidesinthermo-sensitivegelofP.
vulgaris(矗=3)3讨论泊洛沙姆为聚氧乙烯(PE0)和聚氧丙烯(PPO)组成的ABA型嵌段共聚物,其高浓度水溶液具有受热反向胶凝的性质,即冷藏温度下是自由流动的液体而室温或体温时形成澄明的凝胶[3].
泊洛沙姆在多糖定量测定中的干扰,可能是由于其在硫酸作用下脱水形成的化合物可与苯酚反应生成有色化合物,该物质与多糖经显色所得化合物颜色相近,因而造成严重干扰.
经预实验发现泊洛沙姆在室温下易溶于醋酸乙酯,而夏枯草多糖则不溶,据此采用醋酸乙酯为萃取溶剂对多糖及基质进行分离.
但因制剂本身为温敏凝胶,在温度达29~30℃时即可发生相转变而成凝胶,以醋酸乙酯进行液液萃取时属于放热过程,凝胶的胶凝阻碍了醋酸乙酯的萃取,故液液萃取的方式并不适合温敏凝胶中基质与多糖的分离,因此采用先将制剂进行冷冻干燥后,再用醋酸乙酯萃取的方法分离基质与多糖,较符合温敏凝胶的特性,多糖保留率为100.
11%,是较为理想的样品前处理方法,为以泊洛沙姆为主要基质的多糖制剂中多糖的含量测定提供参考.
参考文献:E1]中国药典Is].
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Thermosettinggelswithmodulatedgelationtemperatureforophthalmicuserheologi—calandgammascintigraphiestudies[J].
JControlledRe一/ea5e.
2002,83(1):65—74.
龙血竭胶囊的HPLC指绞图谱研究高秀丽,蒋倩,张敏(贵阳医学院药学院,贵州贵阳550004)摘要:目的用HPLC法对龙血竭胶囊指纹图谱进行研究.
方法采用色谱条件:EclipseXDB—ODS柱(150mm*4.
6ram),流动相为乙腈一水,梯度洗脱进行色谱分离;检测波长为275nm;体积流量为1.
0mL/min;柱温为40℃.
以龙血素B作为参照物.
结果初步建立了龙血竭胶囊的HPLC指纹图谱,并进行相似度评价.
结论方法简单可行,能够有效地控制龙血竭胶囊的内在质量.
关键词:龙血竭胶囊I指纹图谱;HPLC;相似度中图分类号:R286.
1文献标识码:A文章编号:0253—2670(2008)06—0855一04血竭为传统名贵中药,有"活血之圣药"的美誉,含多种黄酮类、皂苷类、甾醇类、萜类和其他化合物,收稿日期:2007—09—30作者简介:高秀丽(1965一).
女,副教授.
硕士.
1990年毕业于华西医科大学药学院,2001—2003年作为英国Portsmouth大学访问学者,2003—2004年作为英国Manchester大学访向l学者.
现为贵阳医学院实验室管理与设备处副处长,在药学系分析测试中心任教.
从事药物质量及其新药开发研究.
药物药动学研究.
Tel:(0851)6908468E—mail:xiuligao@hotmail.
com夏枯草-泊洛沙姆温敏凝胶中多糖的测定作者:姜玲海,冯怡,沈岚,徐德生作者单位:姜玲海,冯怡,沈岚(上海中医药大学,上海,201203),徐德生(上海中医药大学附属曙光医院,上海,200021)刊名:中草药英文刊名:CHINESETRADITIONALANDHERBALDRUGS年,卷(期):2008,39(6)参考文献(3条)1.
中华人民共和国药典(一部)20052.
XuHX;LeeSHS;LeeSFIsolationandcharacterizationofananti-HSVpolysaccharidefromPrunellavulgaris19993.
WeiG;XuH;DingPTThermosettinggelswithmodulatedgelationtemperatureforophthalmicuserheologicalandgammascintigraphicstudies[外文期刊]2002(01)本文读者也读过(10条)1.
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