中和莫斯科街头爆发20分钟激烈枪战

翥学杂志1.
199DVh.
1.
'ie'Sit{e·45急性出血性结膜炎爆发中柯萨基病毒A24变种的分离与鉴定吴冢驹张齐良胡必勇陈茂义(北市生'方疫站,沙市434000)胡希民潭顺华宋平(由匿医学科学院嚣学生物学研究所,昆啊)提要1988年7一儿月谢北沙市出现了~放急性出血性结膜毙(红眼病)的爆发流行,市区发病卑为7瑭.
累计患者不少于L7万人.
用Hel细胞从38侧典型红眼病患者眼拭中分离出病毒28株(74嘶),理化试验与电镜观察提示为肠道病毒,根据其生物学特性与特异性中和宴验证明为柯萨基A组24型变种(CA24V).
检捌的两个毒袜中一株对乳鼠有致病性,而另一株无致病性流行后红眼病48名患者恢复期血清CA24V特异性中和抗体阳性蛊(以》i4为阳性计)为81.
2%,非红眼病对照血清阳性率为14.
6%,差异极显著(P0I),结合流行病学与临床特征,认定是CA24V引起的AHc爆发流牙美健词柯萨奇病毒A24变种急性出血佳结膜盎脑道病毒急性出血性结噗炎(AHC,俗称红眼病)是一种呈爆发流行波及面广的传染病,近2O年来,全世界不同地区出现了多次流行,并证明有两种肠道病毒——肠道病毒70型(EVTo)和柯萨基病毒A24变种(CA24V)是主要病原….
七十年代初以来,国内许多城市亦曾发生红眼病流行,鉴于我国大陆以拄只证明为EV70引起AHC的研究报告,1988年7~11月沙市地区发生AHC流行时,我们作了病毒学与流行病学研究,证明是由CA24V引起的AHC爆发,本文报告病毒学研究结果.
材料与方法一、标本采集本地红眼病发病高蜂期(8月下旬)在市二医琉眼科1诊部现场用棉拭擦洗红眼病人眼结膜及分泌物,置0.
5嘶水解乳蛋白中,立即置冰壶带回试验室,加双抗后放一3O℃冰箱保存.
血请标本采自流行高峰后1个月左右恢复期AHC病人与来患过红眼病的正常人.
均低温冻存.
本文于1989年4月28I:t收到[致谢]:本课题研究工作中,电镜观察得到御北医学院病毒研究所郏志明所亚粱措薜主任的帮助,并赠蛤EV7O抗血清;湖北省医学科学浣病毒所瞄予Hela与Vero细胞:新加坡大学Yin·Ma~phy教授惠蹭CA24Vf表株(EH;70)毒种豆拄血薅.
市第一人民医院岿理科周开敏主任代擞病理切片.
~并深裹诺掌.
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com46冉毒学杂志1.
1口9oVir6loEleSini0=毒分离用Hela细胞管,按常规方法接种'l,37qC静置培养,观察7~9天,出现CPE者臻存留待鉴定.
所用的Hela与Vero细胞均为渐北省医学科学院病毒所赠予.
三、免疫血清制备用本次分离的代表株88E04与88E09在不台血请维持液的Itela细胞瓶串37℃培养2~3天即达完全病变,冻融3冼3000r/m离心20分钟,上清液免疫健康公鸡(1.
5kg左右),方法参考文献2I.
四毒滴定与中和试鼍I用徽板法,基本上按文献【sj进行病毒鉴定时用Vero细胞,测·定人血清抗体时用Hela细胞与88E64病毒抗原.
五曩亿特性试验按文献[''的方法作了耐氯仿,盐酸(PH3.
0),lmol/L.
~fgCl柙热保护及s一礁脱氧屎苷对复斜影响的试验.
'六乳鼠患染试验代表株88E04与88E09扁毒,分别注射同窝出生后≤48小时的昆明种乳鼠各5只,每只注射脑内10撒升,腹腔与皮下各2O撤升,留2~3只对照,放回母鼠缸中按常规观察与传代【2J.
七电镶曩寨由湖北医学院电镜室协助完成.
结果一、流行概况;沙市地区1988年7月第3周眼科门诊红眼病病人开始增加,8月的第3周到9月的第3周为发病高峰,一直延续到l1月中旬才终止,此次流行历时4个月.
经调查推算全市市区人口平均发病率为7,累计患者不少于1.
7万人.
主要临床表现为结膜感染、结膜下出血、异物感眼痒、多泪、眼睑肿胀、眼痛、畏光、双眼受累及部分患者有上感样症状,多数患者一周内恢复,未观察到神经系统方面的疾病.
二、病毒分离:采取38份眼拭标本,经3代培养,已分离出病毒28株,阳性率为74.
按发病到采样的日数分,1—2天为83(25/30),3~4天为38(3/8).
按出现CPE阳性的传代数分,一代阳性20株(53),二代阳性6株(16),3代阳性2株(5)a病毒在HeIa细胞中复制后,CPE明显,早期可见散在的园化细胞,晚期细胞全部固化,继之全部脱落病毒在Veto细胞上产生的CPE与上相同,证明Veto细胞也是敏惑的.
三、病毒的理化特性;几种抵抗力试验结果表明(表1),2个代表株的理化特性相似,都耐酸、抗氯仿,在5一碘脱氧尿苷存在时感染性不下降,能被1mol/LMgCIl保护(在50℃加温6O分钟滴度未明显下降),因此具有肠道病毒的特性.
囊1.
代表株的曩化博性试睦(TCIDsO/O.
1e1)TabIe1.
Physi~~·chemicalehLraeteristieexperimeata0ftwD·tr·_(TcID50/0.
1m1)维普资讯http://www.
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1口口0Vtfelo$IeaSIa;gi47四、电镜观察.
88E04橡感染的Vero细胞,经超薄切片电镜检查,发现细胞浆内青许多呈晶格样排列的病毒颗粒,其直径为25nm左右(见图1).
图l、电镜下所见Ver0躬胞内的病毒野粒,是典型晶格排列直径为25nm(放大39,000倍).
F;g1,E】ect…㈣icgrphofⅡgltlye1tiinedV{T【0nofstr-in88E04j㈣ti】fremVetoce】Icu】t(X30000)五、乳扁感染试验二个代表株注射乳鼠第l代各5只,,到第七天均未见发病,但在第2代第4天时88Eo9株注射的5只乳鼠都比对照鼠小,1周解剖时除个体小外(5.
5克/只:4.
5克/只),还可见白毛比对照鼠少,呈明显发育不良}第3代的第6天,除发育不良外,有一只右前脚向外翻,不能运动,第7天余4只亦全部发病.
病鼠骨骼肌经病理切片证实有柯萨基A组病毒感染的病变特征:肌纤维断裂、失去条纹,单核细胞、多形核细胞与嗜伊红细胞浸润等.
并从病鼠分离到同样病毒.
88E04注射的乳鼠经传4代来见发育不良和发病,与对照鼠体重一样.
六、病毒中和实验鉴定与抗原分析.
我们先用EV70抗血清(含50个中和单位)对2个代表株作中和试验,都未被中帮.
昆明医学生物学研究所鉴定4个毒株(包括88E04与88E09)亦不被EVT0血清中和,但可被cA.
24v抗血清中和.
最后用代表株与新加坡CA24v参考株(EH24/70)作了交叉中和试验与抗原分析,结果表明二者可互相中和且其抗原性相似(表2),从而确证此挽分离的毒株为cA24v维普资讯http://www.
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com48慧.
我们又用自制40个中和单位的88E04抗血清(对本株中和效价为1:1280,免前不含CA24Vt~~)对其余毒株作中和试验,结果均可被1p和.
88E09虽然对乳鼠有致病性,但与EH24/76和88E04可互相中和,未见抗原性有明显差制(表2).
裹2.
代寰株与考椿曲熏曼中和试疃结果Table2Cr~ss-neutralizatioatestswithSingP.
1970AHCepidemi~vtras(cA24v)4ⅡdShashi1998AHCepidemih….
f98E04-nd95E09)七、血清抗体测定检测确系患过红眼病者恢复期血清48份,并设同期中日·面数量非红眼病健康对照,结果表明,48份AHC患者恢复期血清中和抗体阳性(滴度≥l:4)率为81.
2(详见表3).
而同期非AHC健康人群血清阳性率仪为14·6.
两组结果经卡方检验,有极显著差异(P<0.
01).
48名AHC患者中有4人曾作病毒分离,此次中和抗体均为阳性,其中3人病毒分离亦为阳性.
寰3.
49倒AHC毒者收复期血清中和抗体定TIble3Resultsoftralizatlonte"wlthAHCpatients…cnl】eetedfroⅡTBI…eⅡjphnd…ut0I…afrom…-AHCpe…n5抗体滴度AHC^数三小人数%<141:1'91:1G≥1:3P阳性小计919.
98】2.
51531.
2l429.
848.
3差异显著性检验;x42.
7,p<0-01讨论一、此次分离的毒株(代表株)耐氯仿,耐酸,在0.
oo5%~5一碘脱氧屎省中培养感染性不下降,在5O℃中加温能被ImoI/LMgC[t保护而不降低其盛染性,电镜下毒粒毒径约为25nm,并在胞浆内呈典型晶格样排列,具有肠遵病毒的典型特征维普资讯http://www.
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com宿杂虑1,i-0Vir.
1.
'量II.
49工、特异性中和试验表明,此次2个代表株用50个中和单位的EV70抗血清均不能中和,此2个毒株与新加坡EH24/70(CA24v)作交叉中和试验与抗原分析,可互相中和且抗原佳相似,确证为CA24V.
且全部毒株均可被40个单位的自制8~E04抗血清中和,说明此次分离株的抗原性均属CA24v(EH24/.
70)娄.
三、从流行病学上来看,自1969年AHC首先在加纳爆发以来,世界上许多国家出现了AHC的多次爆发流行",而亚州更是多次:出现EV70与CA24V的交替流行"、或混台流行,但1981年是EV70的最后一次世界流行.
1985~1986年新加坡再度发生CA24V的爆发[1,台湾fI"、日本…也同时发生了流行.
近年我国大陆许多大中城市发生了流行,沐挂藩已从1988年北京AHC爆发中分离到CA24Vt.
在调查中我们了解到,沙市的一些学生暑假在北京旅游戡探亲返回途中即得了红眼病,有的是出差从北京、武汉感染归来,这与我们对宿毒的鉴定结果是一致的.
四、病人恢复期抗体测定表明,48名AHC患者恢复期中和抗体阳性率为81.
2,而同期非AHC对照组阳性仅14.
6%,两蛆比较有极显著差异,与印度报告的结果相似,证明系CAZ4V感染所致.
至于对照组有ld.
6抗体阳胜者,可能系隐性感染或非眼部感染所致,因为CA24V引起的&HC患者中有40亦可从萁咽喉分离到病毒,我们在流行病学调查中亦曾观察到有部份AHC患者有感冒样症状.
五、乳鼠感染试验中,观察到一栋病毒对乳鼠有致病性,而另一株传4代册无致病性,提示有二类毒株在人群间传播.
1979年印度AHC流行对分离到260株CA24V,用1O株接种乳鼠,传3~4代均见发病(松弛性麻痹)"].
此次分离到对乳鼠致病与不致病毒株可能是CA24V长期在人群中传播后,其生物学特胜发生了某些改变,这在致病性与流行病学上都是有意义的.
我们这次调查约2O有感冒样疾病,是否与CA2,1V的生物学特性近年发生了某些改变有关,还有待进一步研究证实.
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Qblen州in)AnouthreakofacutehemorrhagicconjunctivitisoccurredinShashi,Huheiprovince,China,duringjuly--novemher1988.
Estimatingcaseswerein17thousand(7)of250thousandpopulatianintheurbandistrict.
Viruswasisolatedinculturesofltelacellsfrolla28ofthe38conjunctlvalswabs(74%).
Accordingtophysieo--chemicalexperimentsandelectronmicrog—raphsuggestthattheviralisolatesaeenterovirus.
AlloftheviralisolateswereidentifiedasanantigenicvariantofeoxsackievirusA24byusingofNT,oneoftwostrainsinducesillnessinsucklingmiceonthesecondpassage.
theotherstrainnopathogenicitywasobservedhyfourthpassage.
Amongthe48AHCpatientsfromwhomconvalescent--phasesarawerecollected,only39(81.
4%)demonstratedanantibodyresponsedetectableatasvrumdilution0f≥1}4,whereasnon--AHCpersons,only70f48serahadelevatedantibodylevel(P01).
Thereforeitisanouthreakofacutehemorr—hagicc0njunctivitisduetocoxsackievlrusA24variantinthearea.
KeywordslCoxsackievirusA24variant(CA24v)Acutehemorrhagicconjunctiviti8(AHC)Enterovirus维普资讯http://www.
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