病毒俄病毒研究所爆炸

188掌囊毫2一iH9Yfretel[~l$11i*A免出血症病毒的形态与结构的研究杨学楼孙松柏王汉中罗经黄文林吴晰莹刘虹王学兰(中田科学院武汉舟研究所,武汉)摄羹晃出血症赢毒无锔椿AR一3的完整病毒颗粒量球形,廿面傩等轴对称、无囊谟.
其直拄约为33--37nm.
空心病毒粒子亦可看蓟.
其核心直径为21--25nm.
病毒衣壳包裹在额粒的最外层.
由紧密连结的子艟所组成,子粒排列规剃.
呈管状结构.
其长度约为s一6nm,中心孔径为2—3nm廿面俸对称的萼远三角形的面由6个子粒所构成.
即每条边上排剜3个子粒.
据此推算出病毒衣壳的子粒总数为42.
分角数为4.
三角形面数为80结构单位数为240.
关t霸:免出血定病毒.
病毒囊粒形斋.
病毒表壳.
病毒子粒1984年初,我国江苏无镊市首次爆发了一种家兔烈性传染病.
198G年初,我们与无锡县科委等单位组成协作组、对引起该病的病原及其流行病学荨方面,进行了调查和研究,证实该病系由病毒感染所致".
随后.
在我国上海、北京,山东、四川、贵州、福建、甘肃湖南、湖北等地也相继报遭了类似的兔病毒病的发生和流行及有关病原的研究由于该病毒的性质较为复杂,各地研究结果报道不一,故一直未能确定该病毒的分类地位.
我们采用了我国原发毒株无锡AR-3为材料,进行了一系列的研究,本文倪就病毒粒子的形态和结构研究结果进行报道.
材料与方法一囊毒曩增殪i,种毒:无锡AtH一3.
由无锡县兽医站提供2.
瘸毒的增殖:取一定量的病曼肝脏,剪碎后,加^0.
85嘶NaC1溶液适量(约1:5/V).
匀浆,加^双抗(青霉素,链霉索吝2800单位),置冰藉过夜后.
次日取出,经陈融一扶后进行低速离心(3500r/~,15--20~nln).
去残燕取悬裱按謇兔体重lml/2—3kg的量.
接种未经免疫的健康家兔.
接种后约18小时开始发病,一般在24--48小时死亡.
在无菌条件下,收集死兔肝脏.
置低温冰箱保存备用.
=囊毒的纬化取痨兔肝脏.
加^5—6倍(/V).
0.
7mraol/LPB,pH7.
2的缓冲液.
匀浆数分钟,加入少许氯仿去脂.
置4O00~'/m离心I5分钟,取上层悬液置lO000r/m离心30mln,收集上屠}茛.
按以下几种方按进一步纯化i维普资讯http://www.
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com病毒学杂圭21989Virelogi~aSialsal891.
40垂蔗糖,60垂泛影葡胺密度梯度离心法【.
1.
经离心后,收集界面问病毒o2.
40嘶蔗糖液,40000r/m离心1小时,所得沉淀经分散成量液,进一步用15--60qb蔗糖梯度离心,分别收集上下两层区带,经离心除糖后,铷戚病毒量液.
或)~JSephsrose2B柱层析分离,收集寨毒蜂o3.
硫酸铵沉淀后超遗离心分离法'¨.
采用35--40和硅酸铵饱和度进行沉淀,然后使用MSE超建离心机在40000r/m离心90rain,收集沉淀,溶于适量0.
7mmol/LpH7.
2的pB中备用.
以上几种纯化方法.
均可获得电穗观寨为句一的纯化南毒越于.
三.
穗奸的电现寨拄常规择作,用日立JEM--100C~电子显微镑进行观察¨l.
结果经上述方法纯化的病毒用日本产岛津uV一300型紫外分析仪测定呈典型核旦白吸收峰特性A26o/A~.
8o=1.
7(见图1).
电镜检查可见大量成熟的实心病毒粒子,呈球形,廿面体等轴对称,无囊膜,直径约为33--37nm,同时也可见到中心充满磷钨酸染液的空心粒子,空心病毒粒子核心直径为21--25nm,(见图皈I.
).
对病毒颗粒精细结梅的研究表明,病毒衣壳包裹在粒子的最外层,由很多形态相似的单位——子粒(Capsomer)所组成,这些子粒排列规射,呈管状结构,其长度约为5—6rim,中心孔径为2--3m(见图版I口).
廿面体对称围1免出血症病毒的紫外吸收特性的荨边三角形商由6个子粒所构成,即每条边Fig.
Iuvtbsorptloa.
.
fprifⅢ上排列3个中空的管状结构子粒(见图版I),RHDVprepayatioul根据计算公式""N=10(n—1)+2,其中N为衣壳(Capsld)子粒总数,n是位于等边三角形面的每条边上的子粒数,此处n=3,由此可推算出免出血定病毒衣壳子粒总数为42.
从图皈Ⅱ可见散在的管状结构的子粒,每个子粒是由若干个结构单位组成.
廿面体等轴对称含有l2个顶点,每个顶点由一个含有5个结构单位昕组成的所谓五聚体子粒所占据,其余3O个呈六聚体的子粒,每个子粒由6个结构单位所组成,整个病毒衣壳共有240个结构单位(见图版I,).
从结构单位数可计算得病毒衣壳的三角形分角数T=4,此外从图皈I还可看到病毒颗粒外周,围绕着14—2O个明暗相间排列的子粒,这些结果与局髓等"和Kurstak.
E等…所报道的有关细小病毒的结构相似.
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coml9O龠毒学杂毒Yit0】0Eje21口89IIIIc维普资讯http://www.
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com病毒学杂志2,J919lri-·loi.
S'-i.
固腹Ⅱ.
舞满絷jfl的空棱表壳和爵救的子粒Pl*teⅡ.
Theeptrcp日ido4r.
pⅢIr·tedbthe自I·iⅡ-Ⅱdthemr-I㈨Pere目….
讨论191细小病毒粒子大小范围一般认为在19--28am左右,日本学者Y.
Matsunaga[11977年分离的一株兔细小病毒测定粒子大小为28am,本文报道我国无锡株Rl病毒粒子大小范围在33-~37nm,这和国内大多数学者所报道的结果是一致的,而比目前巳知的所有细小病毒稍大.
但是,从巳报道的兔出血症病毒粒子的浮力密度值.
空心粒子1.
28一1.
30g/cm.
,实心粒子1.
36~1.
38g/era.
与日本兔细小病毒文献值"1.
80--1.
33g/cm.
和1.
4l—1.
44g/cm相比较,仅略有差异.
通过病毒粒子形态结构的电镜分析.
发现兔出血症病毒无论从形态或病毒衣壳子粒数目,子粒形态和排列方式等与Kurstak,E等所报道的细小病毒科的浓核病毒(DNV)的结构非常类似.
兔出血症病毒这些形态学特征,无疑地对该病毒的分类学地位是有着重要的意义.
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Y.
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com192病毒学象意2-l'鼬Vj¨1oli¨Siat¨StudyontheMorphologyandStructureoftheVirionoftheRabbitHemorrhagicDiseaseVirus(RHDV)YangXue-]ou,SunSonghal,WangHan-zhong,LouJing,HuangWen—ling,WuXi-ying,LiuHong,WangXue—lsn.
(WuhanInstitufeofVirOlogy,AcademiaSinica-Wuhan)InthisFapersomepropertiesoftheoriginalstrainoftheRHDV—A2R一3(separatedfromWuXi,China1984)wasreported.
ThepurifiedvirionsWaSstainedwith2%PTAandexaminedbye]ectromicroseopieobservation.
Theresultsrevealedthatthevirusparticleshavenonenvelopedcspsidandexhibitedicosahedralsymmetry.
Thefullviralparticleshave33--37nmindiameter.
Thecapsomerisseeutohetubelikestr~etureswith5--Saminlengthand2—3nmindiameterofcentralholes.
Thefaceofthetrianglationoftheicosahedronconsistedof6eapsomersandeache&gehas3capsomers,theprimaryfacehas4triaug]es(T=4),thenumberofcapsomersare42,theexpandedfacesare80andthetotalnumbersofthestructuralunitsinacompletevirusparticleare240.
KeywordslRabbitHemorrhagicDiseaseVirus(RHDV),MorphologyofVirions,Capsid,Capsomer维普资讯http://www.
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