病毒达林赞雅

ll争厂l.
6'第9卷第3期1994年9月中国病毒学VⅡt0【DGICASINICA}锕s)Vo1.
9N0.
gSop.
1994白纹伊蚊和埃及伊蚊对基孔肯雅病毒的易感性和传播性的研究米竹青,/张云智.
太理B71000)7'7提要用4株基孔肯雅病毒经口感染白纹伊蚊和埃及伊蚊,进行了易感性和传播性的研究.
结果表,、明,这两种蚊虫对基孔肯雅病毒易感.
无论白纹伊蚊或埃及伊蚊.
感染后第5--5天即可通过吸血将病毒传播给乳鼠.
至第8--13天,传播率可高选5巨55%-1oo%.
感染蚊琦呵经叮咬将病毒传播给小鸡.
埃及伊蚊的易感性和传播率高于白纹伊蚊.
实验还发现,不同来源毒株之间存在一定差异,如分离自云南白纹伊蚊的MS1株的感染率和传播率均高于其它毒株.
这些结果表明.
白纹伊蚊和埃及伊蚊在基孔肯雅病毒的保存和传播中起重要作用.
关键词基孔肯雅病毒,白纹伊蚊,埃及伊蚊,感染率,传播潜能基孔肯雅(Chikungunya.
CHIK)病是经蚊虫吸血传播的一种病毒性疾病,主要分布于非洲和东南亚地区[,一目.
此前已从云南白纹伊蚊中分离出CHIK病毒,并证实本省存在该病及其自然疫源地口].
然而蚊媒的易感性和传播能力是影响虫媒病毒流行和扩散的重要因索之一,为评价我国白纹伊蚊(山.
勋触s)和埃及伊蚊(山aetna)对CHIK病毒的媒介效能,本研究测定了蚊虫经口感染CHIK病毒后的感染率和传播率.
并比较了两种蚊虫和不同毒株闻的差异,现将结果报告如下.
材料与方法l蚊虫实验用白纹伊坟和埃及伊蚊虫株弓『自中国预防医学科学院流行病学和徽生物学研究所建立的实验室种群,本室在自控温湿度的实验室内饲养繁殖,温度丛℃士1.
c.
相对湿度70--75.
每日光照lO小时.
幼虫饲养于搪瓷盆内,饲料为11猪肝馒头粉.
戚虫在蚊茏中饲养.
供血动物为喂白糖水的小白鼠.
2毒株试验用的c蕊病毒为分离自云南的B8655、MS1和87448株c'卅,以及国外原型株Rosa株(引自中国药品生物制品检定所),乳鼠颅内传代两次,收获发病鼠脑.
用含20艋灭活小牛血清乳蛋白Hanks液翩戚l0病毒液,一75℃保存备用.
3抗体CHIK病毒单克隆抗体为本室自涮【日.
兔抗鼠荧光抗体为北京生物制品研究所的产品.
4蚊虫经口感染CHIK病毒的方法对照文卜叮方法进行.
将已浸泡有不同稀释度的病毒液(含等量新鲜脱纤维兔血和10葡萄培)的海绵块置于平皿中,然后放入蚊茏.
让饥饿24—48小时的2一l天龄雌蚊吸食.
1—2小时后.
将蚊虫冷冻麻痹,尽快检出饱食血的蚊虫.
放人蚊茏或玻璃吸蚊管中,饲养于另外的实验室,保持上述温湿度及光照,仅供给l0葡萄堵水.
E易感性试验按国内外公认的方法州进行.
取出感染蚊虫,制备蚊头压碎涂片,用间接免疫荧光试验检·车文于1993年4月13日收到.
9月20日惨回维普资讯http://www.
cqvip.
com196中国病毒学第9卷涮病毒抗原.
用OLYMPUS荧光显徽镜观察结果.
以蚊虫头部神经节出现+或+以上的特异荧光为阳性.
I传播试验&1叮咬乳鼠的传播试验参照文"方法进行.
感染蚊虫单只饲养于玻璃嚷蚊管中.
分别使每只蚊虫叮吸1只2—3天龄小白鼠.
吸血后将乳鼠取出,放回原饲养缸并由原母鼠带养.
逐日观察.
发病或死亡者取脑保存于一30℃待检}未发病者,至第2l天,采血测定CHIK病毒抗体.
如乳鼠jj芒病、检出C$[IK抗体为传播阳性.
&2叮咬小鸡的传播试验0感染蚊虫饲养于蚊笼,至第l0天.
让这些雌蚊吸食健康的2丑龄鸡.
两天后采血测定病毒血症,观察蚊虫能否通过吸血将病毒传播给小鸡.
7病毒和抗体检查方法感染小鸡血、乳鼠脑和部分感染蚊虫,常规制成接种液.
接种Vcro细胞以分离病毒,用免疫荧光法检测.
鼠血清中的c砸病毒抗体用血凝抑制试验测定.
结果l感染白纹伊蚊和埃及伊蚊中病毒量测定雌蚊感染cH取病毒后第l0天,进行TCID~滴定,两种蚊虫在Veto细胞中的病毒滴度为lO''一l0之间(表1),表明蚊虫感染CHIK病毒后,通过一定的增殖期,其体内有较高的病毒量.
寰1白毁伊蚊和墟及伊蚊感集口ⅡK病毒后第1O夭的H弼定T1T(3D~otandmmquilocsm血el0tb哪minfectionmCH1K·】.
I1OTⅡD/0.
1mlFil~resin咐汕e凼耻enLunbcr唾mo~uib3cstitrM~]-2白纹伊蚊和埃及伊蚊对CHIK病毒的易感性试验用CHIK病毒M81株的l0悬液感染雌蚊,在感染后第3天,白纹伊蚊和埃及伊蚊的阳性率分别为41I66和50.
至第5天阳性率上升,第8一l0天感染率达到高峰,白纹伊蚊分别为.
58.
33、58.
33和75.
而埃及伊蚊均达100,表明埃及伊蚊的经13感染率明显高于白纹伊蚊,详见表2.
甩3株CHIK病毒的l0--10悬液感染蚊虫(同一病毒悬液分别感染两种蚊子),至第8天,对蚊头部神经节进行了免疫荧光检查.
白纹伊蚊的50蚊虫经口感染病毒量(0D)为lO'_一lD_.
-",埃及伊蚊为1O"一l0一.
甩l0一l0病毒液感染白纹伊蚊,大多数蚊虫的头部神经节中检查到病毒抗原,至l.
时开始降低,l'时仅有个别蚊虫感染病毒.
埃及伊蚊在lO一一l0一时,绝大多数蚊虫的病毒检查为阳性,至l0降低,l0时阳性率较低.
结果表明,这两种蚊虫对CIUX病毒敏感,但其敏感性有差异.
白纹伊蚊低于埃及伊蚊.
表3显示,M81株的OID50较高,B8635株次之,Ross株较低,显然不同来谭毒株间存在差剐.
维普资讯http://www.
cqvip.
com第3期张海林等白纹伊蚊和埃及伊蚊对基孔衰2aⅡK病毒MB】株的易毒性比较Tabk~2Ocmpm'Idlve∞【ib嘶d呻to如嘶mMS1岫da砥virIIl97注.
㈣病毒的感染稀释度为10一.
N"e.
Dilu~n饥缸c删aUK扫lz衰3白!
T3aⅡK病毒株的昌蒜性比较删脚呻叩鼬嘶d脚面如amd拙呻mjm她啪I如咖Wi血嘲I蛐maIⅢVin珥·.
5O蚊虫经口感染量.
伽枷d嘲-··}阳性教,斌暄教.
Nv毗储ld3白妓伊蚊和埃及伊蚊对cH雎病毒的传播试验蚊虫感染后第8天,无论白纹伊蚊或埃及伊蚊均能通过叮咬吸血将cHⅨ病毒传播给乳小白鼠.
两种蚊虫对不同毒株的传播观察,结果埃及伊蚊对MS1株的传播率为100a/~,其余毒株以及白纹伊蚊对3株CHIK病毒的传播率在44.
4d一66.
67之间,详见表4.
维普资讯http://www.
cqvip.
com198中国病毒学第9卷衷4白纹伊垃和唆殛伊蚊感染c啡病毒后第8天的传播结果Table4Trav.
~i(mⅫ№andn嘲吣∞thdayt冒蛔h劬hCHIKvirus袁5显示,雌蚊感染后第5—6天即可通过叮咬将病毒传播给乳鼠,传播率随感染后天数的增加而递增,至第8—13天,传播率较高,而且埃及伊蚊的传播率高于白纹伊蚊.
衰5白纹伊垃和姨蛀感染cHⅨ病毒砌1Ta№5mt蝉删锄出删tdays脚蜘withM8]str~na证咕四白纹伊毂^k脚埃及伊蚊,4ed~饼d28,67(2/7)'蠲.
57(2/7)55;55(5/9)s'55(5)66.
67(6/9)卵-50(砷50.
00(4,8)66.
67(6,g)100.
O(7,7)盯50(7/8)-传播百分率(传播乳鼠阳性数/试验敦).
删时t~on(No.
of暑u出Ⅱd∞t哪啪|d∞/I删).
另外.
罐蚊经口感染cHⅡ【病毒后第1O天,通过叮咬健康2日蛉鸡,白纹伊蚊的传播率为62.
5(s/8),埃及伊蚊为75.
0(6/8),证明这两种蚊虫通过吸血可将CHIK病毒传播给小鸡.
'感染蚊虫病毒的分离为进一步验证上述试验的可靠性,用lO-Z—l0CHIK病毒液感染白纹伊蚁和埃及伊蚊,每批10一l5只雌蚊.
于感染后第8天,分批研磨蚊虫,制成l0-1悬液,乳鼠脑腔接种以分离病毒,结果均能引起乳鼠发病或死亡,分离到的毒株能稳定传代和保存.
这些发病鼠脑制备的抗原具有血凝特性,用CHIK病毒单克隆抗体血凝抑制试验嘲和免疫荧光试验鉴定,均证明与原CHIK病毒株同属一个类型.
讨论本研究证明,白纹伊蚊和埃及伊蚊通过吸食病毒液后,不仅能感染CHIK病毒并能在其体维普资讯http://www.
cqvip.
comt第a期张海林等:白纹伊蚊和埃殛伊虹对基孔肯雅病毒的易感性和传播性的研究199内增殖.
两种蚊虫对CHIK病毒均较为敏感.
雌蚊经口感染CHIK病毒后,经过一定的潜伏期,通过叮咬吸血,又可将病毒传播给乳鼠或小鸡.
这些实验表明,这两种蚊虫均具有生物学媒介的效能,对它们在流行病学上的意义应BI起高度重视.
国外研究认为,不同地理株白纹伊蚊对CHIK病毒的易感性存在差异["".
Tesll等比较了l3个地理株白纹伊蚊对cHⅨ病毒的易感性,发现它们之问差异很大.
感染率最高的是来自夏威夷的Oab.
u株(71和97),较低的是台北株(25和28)及毛里求斯株(19和32)[I].
本研究首次对我国白纹伊蚊株进行试验.
结果表明该蚊的经口感染率较高,10一l0病毒液的感染率分别可达58.
33一75.
0O(第8—10天)和28.
75一62.
5O(第8天),与泰国、越南和印度的白纹伊蚊易感性相似∞.
白纹伊蚊传播cHⅡ(病毒的研究甚步.
本研究结果表明,该蚊具有较高的传播率,蚊虫感染CHIK病毒后第5~6天即有传播性,至第8—13天为传播高峰期.
白纹伊蚊在我国分布较广口5],在我省热带和亚热带地区也是野栖蚊中的优势种,主要嗜吸人类和家畜血液.
白天活动.
我们曾首次证实自纹伊蚊存在CHIK病毒自然感染[5].
实验和现场证据充分说明,白纹伊蚊在云南CHIK病毒的保存和传播中起重要作用.
埃及伊蚊是基孔肯雅病城市型疫源地主要媒介口.
在亚洲,以埃及伊蚁为主要媒介曾引起若干起流行,在坦桑尼亚,尼目尼亚、塞内加尔、泰国和印度的许多地区均从该蚊分离出CHIK病毒[2_….
Mourya等对印度埃及伊蚊的研究发现,该蚊对CHIK病毒的易感性和传播率很高,蚊虫感染后第2天感染率可达50.
00一68.
75%,传播率为8700,至第4—5天几乎所有蚊虫均感染和传播CHIK病毒,第7一l0天两者均达100啪.
我国埃及伊蚊对CHIK病毒的易感性和传播性均低于印度埃及伊蚊,然而,实验数据表明,我国埃及伊蚊仍然具备CHIK病毒有效媒介的条件.
在我国,埃及伊蚊主要分布于海南以及广东和广西沿海地区[15],虽然这些地区未发现该病.
但CHIK病毒一旦传入,I起流行的可能性依然存在,应提高警惕.
Turell等和Mangiafico的实验认为,白纹伊蚊对CHIK病毒的易感性和传播率明显高于埃及伊蚊[1l,14].
然而,M~urya等的试验则表明,印度埃及伊蚁具有非常高的感染率和传播率[.
本实验发现,我国埃及伊蚊的易感性和传播率均高于白纹伊蚊,这些差异可能与不同地理株蚊虫有关.
许多研究证实,不同地区分离的虫媒病毒毒株在生物学特性上存在差异,蚊虫对不同来源CHIK病毒的易感性和传播性也有不同z-"].
在我们的实验中,分离自不同地区或不同宿主的毒株亦有差异,如分离自云南白纹伊蚊的MSI株在两种蚊虫中的感染率和传播率均高于其它毒株.
参考文献1WHOSelen|i~.
~Group.
Arth~Ixl-lx,rne且ndR0d口|t.
/~31Tt~ViralD【擘ca∞0crwHO.
I985·152Fatrabat~#Ned,Ln|ernat[onalCatalogueArbovlrusesI|ldId_mBC=rt~nOtherViruses.
fVcrtc~atcs.
3r'l.
d,Antonio.
T#^mSo=TcopHyg,1985:327--3283张海林,施华芳.
刘丽华,荨.
从云南省蝙蝠中分离基孔肯雅病毒及血清抗体调查.
病毒学报,1989I5(1):31~36菇华芳,张海林,自登云一荨-云南首次从患者体内分离到基孔肯雅病毒.
巾国』、兽共患病杂志.
1990=6(1)~{米付青.
张海林.
施华芳一荨·云南蚊虫基孔肯雅病毒分离和鉴定.
云南医药,l900}1l(6)t272~273张天奇,扬兰萍,袁晓平,尊.
抗基孔肯睢病毒单克隆抗体的杂交窟细胞系及应用研究.
中目』、兽共患病杂志,1991'7维普资讯http://www.
cqvip.
com200中国病毒学第9卷(1)l2~57Rc~enL,Ro~.
boomLE·GuHDJ,正Compara~w埘e叫础"·嘲岫spe~sandJnra~mto删andp0tent~din-砸肌with曲'5andJapBf瑚日扭a蜘svl酗-AmJTropcdH巴|l985I34(3)l603--6158TcshRB,GuZ~rDJ-R∞L,-Vari~onamonggeosrap.
~~strains皤^如曲叩岫口mH∞埘蛐toinfection啪clfiktmgmxyavL,qL~AmJTropmHy$-]976l25(2)l326—3359MouryaDT,M山j岫AS'胁j*K,-Su~tyandt|啪凼ofA=~es埘批tofour蛐咖~bltmtgznD~virus.
IndianJhiR曲,1g盯}86(August);185--1901OppRJ,姗B3'E蛐KH,d-1I-如瞰肌时i妇aI.
d脚岫m∞il棚恤出n暑I|emaI.
d咿ny曲mkwvi嗍Ap0廿l山ofhu眦n址加曲L^n1J删Hyg,1991I45(2);202--2]011M衄ld∞JA-(alkungunya璐Llffecl~onandmm眦血妇infive印.
d圆m∞4u№.
AmJTrop日Hyg-1g71}20(4)'642--64512BB日∞KjM∞fyaDT,MB1llr1皿IA&sl叩'ib丑ilyandn曲脚出蛐y缸de椭t呵a血沁咀m~raim-如岫捌"·嘲IdI帽to~b~ungunyavirm.
IndianJ咖R酋,198.
8}87(Februmy):134一l3813MDT·aACj&帅R&.
n瑚越I出Japcmeseel皿蛐virusin芦妇and妇峨mosquitoes.
IndianJR∞[^],1991p930~ty-)t250--25214T伽MJjBe咖舶JR'Tmunmr~oRF-Smcepti~itysclccmdnrah埘,辫andd'cI(Ⅸp'啊lQmi:)tochu"virus-JME|It曲『d,]992129(1)'曲一53l5砧宝辩主编.
中国登革热媒介丑其防浩.
第1版,贵阳;贵州人发出版社,]990;{7—5116s盯】"hECnV噼diB9臣In=M酣_山ethe1op,W∞drl1ffAWed.
2nded.
Newyork;0L毗血iIIn鲫,1984t312—3l3Susce—ptibilityandTransmissibilltyofAedesalboplctusandAedesaegyptiMosquitoestoChikungunyaVirusZh哪HailmMiZhuqingZhangYunzhi(Yw岫血鼬渊Co.
trot朔cf墙踟,Da/i,嘲Prom=ce671000).
妇幽幽峪and.
0En1循quit.
esweretest~lbyoralinfectionwithfourstrainsofChdkumgunya(CHIK)virusisolat~fromYu.
Chir~andAfricafortheirsascep~ihilityandtransmlssihili-ty.
Studi~showedthatthe∞twospeciesofmosquitoesweresusceptibletoCHⅨvirus.
EitherAe.
Ⅱbo/~n.
soi-Ae.
for5thto6thdayafterinfectionwerecapableoftransmittingCHIKvirusbybjtetock‰gmice.
Theirtr~isslonrateswere55,55一100.
nthe8thto13thdayp∞t-iIlf吣tion.
Inanotherexperiment,infectedm~quitoesworecap~leoftransmi]tingCHIKvirusbybitetochickens.
InfectionandtranamL~ionrateswerehigherinAe.
d.
testedthanin山.
幽tested.
The目.
eptibilityandtransmissionpotentialsofthedefferentstrainsofCHIKvirushadsomedifferencesfromeachother,suchastheMS1strainisolatedfrom出.
撕inYunnanwssapparentlymorevirulentthantheotherstrains.
Theseresultsindicatethat出.
幽Gand出.
fromChi.
ImhavethepotentialtoplayaroleinthemaintenanceandtransmissionofCHIKvil-i.
~innatttra.
KeywordsChik~mganyaVirus·Mosquitoes,幽砌船,AMe*删,Infectionrate,Transmis-sionpotential维普资讯http://www.
cqvip.
com