玉米赤霉烯酮酶免试剂盒[18min宽谱型]说明书地址:中国·无锡建筑西路599号ADD:No.
599JianzhuxiRoadWuxi,ChinaTEL:0510-851299094006871900FAX:0510-85129699玉米赤霉烯酮(ZEN)酶免检测试剂盒使用说明书【产品代码:MYT02600】试剂盒组成1.
1玉米赤霉烯酮(ZEN)包被反应板96孔1.
2ZEN标准溶液(0、1、3、9、27、81ppb)1套1.
3ZEN抗体溶液2瓶1.
4酶标二抗溶液2瓶1.
5显色液…2瓶1.
6终止液…1瓶1.
7浓缩洗涤液(10*2瓶1.
8样品稀释液…2瓶1.
9浓缩PBS溶液(10*1瓶1.
10酶标板框架1块仪器设备配置2.
1微量移液器,量程20~200L(建议尽可能选配8道或12道微量移液器)2.
2酶标仪(带450nm波长)2.
3小型粉碎机或均质机2.
4离心机、振荡器或超声仪2.
5恒温培养箱2.
6分析天平2.
7冰箱2.
8玻璃器皿:锥形瓶、烧杯、移液管、滤纸、漏斗等操作流程图适当稀释加样(90s)37℃,10min样品提取——————→试剂准备——————→免疫反应———————→37℃,8-10min目测、仪器法显色反应—结果判定—计算含量玉米赤霉烯酮酶免试剂盒[18min宽谱型]说明书地址:中国·无锡建筑西路599号ADD:No.
599JianzhuxiRoadWuxi,ChinaTEL:0510-851299094006871900FAX:0510-85129699实验准备4.
1样品处理:详见"样品处理方法".
4.
2洗涤液的配制:取适量【浓缩洗涤液(*10)】用蒸馏水稀释10倍待用.
例如:取5mL【浓缩洗涤液(*10)】,加45mL蒸馏水,混匀后制成实验用洗涤液,足够24孔实验使用.
4.
3温度恢复:取出试剂盒中的检测试剂、待测样液,放置在室温及避光环境30min以上,恢复至室温,降低由于试剂温差引起的实验偏差.
实验步骤5.
1试剂平衡:将试剂盒所有试剂取出,室温中放置30min以上,平衡至室温.
5.
2小孔编号:移取所需微孔放置反应板支架上,设置ZEN标准溶液对照孔和样品孔(定量测定时设置1-6号为标准对照孔,其余为样品孔;定性测定时设置1-2号为标准对照孔,其余为样品孔).
5.
3免疫反应:按系列步骤所示,依次加入配制好的溶液及待测样液.
第一步:1-6号孔分别加入50LZEN标准溶液(0、1、3、9、27、81ppb),其余孔加入相应的待测样液.
第二步:向各微孔中分别加入50LZEN抗体溶液及50L酶标二抗溶液.
第三步:轻轻振摇,使各孔中反应物混匀.
第四步:37℃,孵育10min.
5.
4洗涤:用力甩掉微孔中的反应液(甩3次),在吸水纸上拍干(拍3次).
每孔加入250L(约5滴)洗涤液,洗液不得溢出,轻轻敲击反应板框架10秒,用力甩掉洗液(甩3次),在吸水纸上拍干(拍3次).
按上述操作再重复洗涤4次,最后一次要保证微孔完全拍干.
5.
5显色:在每个微孔中加入100L显色液,混匀,放入37℃孵育箱中,显色8-10min.
反应物组成表操作步骤加入量孔号123456第一步50l01392781待测样液第二步50lZEN抗体溶液50l酶标二抗溶液第三步摇匀第四步37℃,孵育10min玉米赤霉烯酮酶免试剂盒[18min宽谱型]说明书地址:中国·无锡建筑西路599号ADD:No.
599JianzhuxiRoadWuxi,ChinaTEL:0510-851299094006871900FAX:0510-851296995.
6终止:在每个微孔中加入50L终止液,轻轻敲击微孔板,使反应物混匀.
5.
7读数:将反应板在5min内放入450nm酶标仪中读取吸光度值(OD值).
结果计算6.
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6.
2作图定量计算法将系列ZEN标准溶液(0,1,3,9,27,81ppb)测得的吸光度OD值,绘制成标准曲线(见示意图).
横坐标为标准溶液浓度的常用对数值(lgC),纵坐标为各标准孔OD值与0ppb标准孔OD值的比值(B(标准液)/B(0ppb)).
玉米赤霉烯酮(ZEN)标准曲线示意图(注:示意图仅供参考)计算待测样品孔OD值与OD(0ppb)的比值(B样品/B(0ppb)),查标准曲线,可得到相应待测样液浓度(C)的常用对数值lgC,对其求反对数,可求得待测样液的ZEN浓度C.
按下列公式计算出样品中ZEN的含量:ZEN含量(g/kg)=C*V*Dm式中:C:待测样液中ZEN含量(ppb或g/kg)V:样品提取液体积(mL)m:样品质量(g)D:样品提取液的再稀释倍数6.
3确证实验对于重要样品、疑似样品,建议采用试剂盒进行初步筛查检测,再用国家标准方进行确证.
玉米赤霉烯酮酶免试剂盒[18min宽谱型]说明书地址:中国·无锡建筑西路599号ADD:No.
599JianzhuxiRoadWuxi,ChinaTEL:0510-851299094006871900FAX:0510-85129699样品处理7.
1玉米(食品或饲料级)称取5.
0g样品(注:粉碎,过20目筛)于100mL具塞三角瓶中,准确加入25.
0mL70%甲醇水(7+3)溶液,振摇10min(约200rpm).
取适量样品的甲醇水提取液于离心管中,3500rpm以上,离心5min,取上清液中间层,即为样品提取液.
取0.
2mL玉米样品提取液,加1.
0mL【样品稀释液】,混匀即得玉米待测样液(稀释系数30).
将待测样液进行ELISA分析测定.
7.
2普通饲料称取5.
0g样品(注:粉碎,过20目筛)于100mL具塞三角瓶中,准确加入25.
0mL70%甲醇水(7+3)溶液,振摇10min(约200rpm).
取适量样品的甲醇水提取液于离心管中,3500rpm以上,离心5min,取上清液中间层,即为样品提取液.
取0.
2mL饲料样品提取液,加1.
0mL【样品稀释液】,混匀即得饲料待测样液(稀释系数30).
将待测样液进行ELISA分析测定.
7.
3玉米油(成品油或毛油)称取5.
0g样品于100mL具塞三角瓶中,准确加入25mL70%甲醇水(7+3)溶液,再加入20mL正己烷(或石油醚),振摇15min(约200rpm).
静止5min分层后,取适量下层样品甲醇水提取液于离心管中,3500rpm以上,离心5min,再取上清液中间层,即为样品提取液.
取0.
2mL玉米油样品提取液,加1.
0mL【样品稀释液】,混匀即得玉米油待测样液(稀释系数30).
将待测样液进行ELISA分析测定.
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