培养基梅西的红牌冤不冤

摇动物学杂志悦澡蚤灶藻泽藻允燥怎则灶葬造燥枣在燥燥造燥早赠摇圆园员员袁源远渊源冤院源圆耀源远实验室薄口螨的大量培养及休眠体的诱导赵晓平摇刘晓光包头师范学院生物科学与技术学院摇包头摇园员源园猿园摘要院用玉米粉培养基尧月再渊牛肉膏垣酵母膏冤软琼脂培养基尧月再培养液猿种培养基对实验室薄口螨渊匀蚤泽贼蚤燥泽贼燥皂葬造葬遭燥则葬贼燥则蚤怎皂冤进行了培养遥其最适培养基是玉米粉培养基曰该螨在月再软琼脂培养基上也能生长袁但生长速度比较缓慢袁经过月再软琼脂培养基的培养袁能够收集到大量干净的个体袁为阅晕粤提取和分子生物学研究提供了方便曰在月再培养液中袁实验室薄口螨不能进行继代生长袁但能够产生大量的卵袁可收集卵做更进一步的深入研究遥休眠体是该螨生活史中的重要阶段袁是借助携播者进行传播的特殊形式遥对孳生于培养有果蝇的玻璃指管中的实验室薄口螨产生的休眠体及其在果蝇体表的吸附状况进行了观察袁利用较高温度渊猿园耀猿缘益冤培养基逐步干燥尧较低温度渊员园耀员缘益冤尧月再液体培养猿种方法袁可以诱导该螨休眠体集中大量地形成袁方便收集休眠体袁是对其进行生理生化尧基因表达尧疾病传播机理等方面研究的先决条件遥关键词院实验室薄口螨曰培养曰休眠体曰诱导中图分类号院匝怨缘缘摇文献标识码院粤摇文章编号院园圆缘园鄄猿圆远猿渊圆园员员冤园源鄄源圆鄄园缘酝葬泽泽悦怎造贼怎则藻燥枣匀蚤泽贼蚤燥泽贼燥皂葬造葬遭燥则葬贼燥则蚤怎皂葬灶凿栽澡藻蚤则匀赠责燥责蚤陨灶凿怎糟贼蚤燥灶在匀粤韵载蚤葬燥鄄孕蚤灶早摇蕴陨哉载蚤葬燥鄄郧怎葬灶早云葬糟怎造贼赠燥枣月蚤燥造燥早蚤糟葬造杂糟蚤藻灶糟藻葬灶凿栽藻糟澡灶燥造燥早赠袁月葬燥贼燥怎栽藻葬糟澡藻则泽爷悦燥造造藻早藻袁月葬燥贼燥怎摇园员源园猿园袁悦澡蚤灶葬粤遭泽贼则葬糟贼院匀蚤泽贼蚤燥泽贼燥皂葬造葬遭燥则葬贼燥则蚤怎皂匀怎早澡藻泽蚤灶凿蚤增蚤凿怎葬造泽憎藻则藻糟怎造贼怎则藻凿蚤灶糟燥则灶责燥憎凿藻则糟怎造贼怎则藻皂藻凿蚤怎皂袁月再渊遭藻藻枣藻曾贼则葬糟贼垣赠藻葬泽贼藻曾贼则葬糟贼冤泽燥枣贼葬早葬则糟怎造贼怎则藻皂藻凿蚤怎皂袁葬灶凿月再渊遭藻藻枣藻曾贼则葬糟贼垣赠藻葬泽贼藻曾贼则葬糟贼冤糟怎造贼怎则藻造蚤择怎蚤凿援栽澡藻皂燥泽贼泽怎蚤贼葬遭造藻糟怎造贼怎则藻皂藻凿蚤怎皂枣燥则贼澡藻皂蚤贼藻泽憎葬泽糟燥则灶责燥憎凿藻则糟怎造贼怎则藻皂藻凿蚤怎皂曰贼澡藻赠早则藻憎皂燥则藻泽造燥憎造赠憎澡藻灶糟怎造贼怎则蚤灶早蚤灶月再泽燥枣贼葬早葬则糟怎造贼怎则藻皂藻凿蚤怎皂贼澡葬灶蚤灶糟燥则灶责燥憎凿藻则糟怎造贼怎则藻皂藻凿蚤怎皂遭怎贼灶怎皂藻则燥怎泽糟造藻葬灶蚤灶凿蚤增蚤凿怎葬造泽糟燥怎造凿遭藻糟燥造造藻糟贼藻凿枣燥则阅晕粤藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶葬灶凿皂燥造藻糟怎造葬则遭蚤燥造燥早赠则藻泽藻葬则糟澡援粤造贼澡燥怎早澡匀援造葬遭燥则葬贼燥则蚤怎皂匀怎早澡藻泽糟燥怎造凿灶燥贼早则燥憎早藻灶藻则葬贼蚤燥灶遭赠早藻灶藻则葬贼蚤燥灶蚤灶月再糟怎造贼怎则藻造蚤择怎蚤凿袁贼澡藻赠糟燥怎造凿责则燥凿怎糟藻灶怎皂藻则燥怎泽燥增葬憎澡蚤糟澡糟燥怎造凿遭藻糟燥造造藻糟贼藻凿枣燥则则藻泽藻葬则糟澡援匀赠责燥责蚤憎藻则藻泽责藻糟蚤葬造蚤扎藻凿枣燥则皂泽燥枣贼澡藻皂蚤贼藻泽贼燥凿蚤泽责藻则泽藻遭赠皂藻葬灶泽燥枣燥贼澡藻则葬灶蚤皂葬造泽援匀赠责燥责蚤燥枣匀援造葬遭燥则葬贼燥则蚤怎皂匀怎早澡藻泽糟燥怎造凿责则燥责葬早葬贼藻蚤灶贼澡蚤灶早造葬泽泽责蚤责藻憎澡藻则藻枣则怎蚤贼枣造蚤藻泽澡葬凿遭藻藻灶藻曾蚤泽贼藻凿葬泽憎藻造造葬泽燥灶贼澡藻遭燥凿赠燥枣枣则怎蚤贼枣造蚤藻泽援杂藻增藻则葬造皂藻贼澡燥凿泽蚤灶糟造怎凿蚤灶早责则燥早则藻泽泽蚤增藻造赠凿则赠蚤灶早燥枣糟怎造贼怎则藻皂藻凿蚤怎皂葬贼澡蚤早澡贼藻皂责藻则葬贼怎则藻渊猿园原猿缘益冤袁糟怎造贼怎则藻葬贼造燥憎藻则贼藻皂责藻则葬贼怎则藻渊员园原员缘益冤袁葬灶凿造蚤择怎蚤凿糟怎造贼怎则藻糟燥怎造凿蚤灶凿怎糟藻匀援造葬遭燥则葬贼燥则蚤怎皂贼燥枣燥则皂澡赠责燥责蚤皂葬泽泽贼澡葬贼糟燥怎造凿遭藻糟燥造造藻糟贼藻凿枣燥则蚤贼泽责澡赠泽蚤燥造燥早蚤糟葬造袁遭蚤燥糟澡藻皂蚤糟葬造袁早藻灶藻藻曾责则藻泽泽蚤燥灶袁凿蚤泽藻葬泽藻泽责则藻葬凿蚤灶早皂藻糟澡葬灶蚤泽皂葬灶凿燥贼澡藻则则藻泽藻葬则糟澡藻泽援运藻赠憎燥则凿泽院匀蚤泽贼蚤燥泽贼燥皂葬造葬遭燥则葬贼燥则蚤怎皂曰悦怎造贼怎则藻曰匀赠责燥责怎泽曰陨灶凿怎糟贼蚤燥灶基金项目摇内蒙古自治区高等学校科学研究项目渊晕燥援晕允园怨员缘员冤曰第一作者介绍摇赵晓平袁男袁教授曰研究方向院动物遗传育种与繁殖学曰耘鄄皂葬蚤造院扎曾责灶皂遭贼岳员远猿援糟燥皂遥收稿日期院圆园员园鄄员园鄄猿园袁修回日期院圆园员员鄄园源鄄员员源期赵晓平等院实验室薄口螨的大量培养及休眠体的诱导窑源猿摇摇摇窑摇摇螨类的生活环境多种多样袁与人类生活关系非常密切遥有些种类是疾病的传播媒介袁有些是土壤形成的参与者和生物防治的重要因素遥农业害螨造成粮食减产袁而有一些种类又是害虫的天敌袁空气中的螨类是人体的过敏源遥尽管螨类有多种多样袁但是由于螨类个体微小尧肉眼不容易观察尧世代历期短尧发生和生长具有明显的季节性袁多数螨类不能够在实验室连续进行培养袁进而限制了对螨类的深入研究袁其研究水平十分滞后遥王敦清等咱员暂于员怨怨圆年在养殖果蝇渊阅则燥泽燥责澡蚤造葬皂藻造葬灶燥早葬泽贼藻则冤的培养管中发现了实验室薄口螨渊匀蚤泽贼蚤燥泽贼燥皂葬造葬遭燥则葬贼燥则蚤怎皂冤袁对其进行了分类地位的确定袁该螨隶属于蜱螨亚纲渊粤糟葬则蚤冤真螨总目渊粤糟葬则蚤枣燥则皂藻泽冤薄口螨总科渊匀蚤泽贼蚤燥泽贼燥皂葬贼燥蚤鄄凿藻葬冤薄口螨科渊匀蚤泽贼蚤燥泽贼燥皂葬贼蚤凿葬藻冤遥同时也对该螨的形态特征及生活史进行了描述遥实验室薄口螨生活周期短袁子代数量巨大袁不同生活阶段的个体形态差异明显遥黄国城等咱圆暂为了观察该螨的形态和个体发育袁对其进行了单只塑料凹孔板密闭培养遥为了在短期内能够收集到大量干净的个体和成批的休眠体袁以便对其进行阅晕粤提取尧生理生化尧分子生物学等方面的研究袁我们利用几种不同的培养基和诱导方法对该螨的培养效果尧螨体的收集方法尧影响休眠体形成的因素等进行了研究袁获得了较为有益的结果遥员摇材料与方法员郾员摇实验材料摇实验室薄口螨成螨收集自培养果蝇的指管培养基表面遥几种不同培养基配制所需的营养物院玉米粉尧蔗糖尧琼脂尧酵母粉尧牛肉膏尧酵母膏尧蛋白胨尧葡萄糖尧蒸馏水遥药品和耗材院丙酸尧氯化钠尧氢氧化钠尧苑园豫乙醇尧脱脂棉尧责匀试纸等遥员郾圆摇实验方法摇采用玉米粉培养基尧月再软琼脂培养基尧月再培养液对实验室薄口螨进行了培养和观察曰对孳生于培养有果蝇的玻璃指管内的实验室薄口螨休眠体吸附果蝇身体表面的情况进行了观察和拍照曰在较高温度渊猿园耀猿缘益冤尧较低温度渊员园耀员缘益冤尧月再培养液进行培养的条件下对该螨休眠体的形成进行了诱导试验遥员郾圆郾员摇实验室薄口螨的培养观察摇玉米粉培养基配方参考李雅轩等咱猿暂的方法稍加改动遥如果配制猿园园皂造的培养基袁取红糖或白糖猿猿早袁琼脂圆郾缘早袁放入一个缘园园皂造的烧杯中袁加员源缘皂造水袁煮沸溶解袁不时用玻璃棒搅拌袁再将圆缘早玉米粉和员源缘皂造水放入另一个猿园园皂造的烧杯中袁将玉米粉调成糊状袁倒入前一个缘园园皂造的烧杯中混匀袁继续加热袁同时不停地搅拌袁待培养基熬制好后分装到洗净已灭菌的直径为远糟皂的小培养皿中袁过夜冷却袁然后在超净工作台或无菌条件下进行实验室薄口螨的接种遥每个培养皿接种成螨缘对渊缘意袁缘冤在圆缘益条件下进行培养遥月再培养液的配方如下院员豫蛋白胨尧园郾缘豫牛肉膏尧园郾缘豫酵母膏尧园郾缘豫葡萄糖尧园郾缘豫晕葬悦造尧责匀调至苑郾缘遥月再软琼脂培养基是在月再培养液配方的基础上再加园郾猿豫的琼脂遥按其配方分别配制员园园皂造分装到员缘园皂造的三角瓶中袁高压灭菌后倒平板于灭菌的小培养皿中袁每皿员园皂造左右遥冷却后接种实验室薄口螨成螨员园耀员缘只袁培养期间每天观察一次遥员郾圆郾圆摇实验室薄口螨休眠体的形成和诱导摇在培养果蝇时袁注意到了实验室薄口螨的休眠体产生于培养果蝇的玻璃指管中袁为了了解实验室薄口螨休眠体与果蝇的关系以及传播途径袁首先对孳生于培养有果蝇的玻璃指管中的实验室薄口螨产生的休眠体进行了观察遥由于玻璃指管较长尧口径较小袁内壁上有大量的果蝇排泄物袁休眠体与果蝇生长在一起袁收集休眠体既不方便也不卫生袁同时也不便于观察遥为避免以上缺陷袁我们利用口径远糟皂的小培养皿对实验薄口螨进行了单独培养袁然后分别改为以下猿种培养条件对休眠体的形成进行了诱导试验院淤将生化培养箱的培养温度调至较高渊猿园耀猿缘益冤袁玉米粉培养基逐步失去水分变得较为干燥曰于在较低温度渊员园耀员缘益左右冤条件下窑源源摇摇摇窑动物学杂志悦澡蚤灶藻泽藻允燥怎则灶葬造燥枣在燥燥造燥早赠源远卷进行培养曰盂利用不加琼脂的月再培养液进行培养遥员郾圆郾猿摇拍照摇将漂浮在月再培养液表面的卵尧吸附有休眠体的果蝇从培养指管转移到小培养皿再经乙醚轻度麻醉尧月再培养液表面形成的休眠体分别在实体摄影显微镜下进行拍照渊放大猿园倍冤遥圆摇结摇果圆郾员摇培养结果和观察摇玉米粉培养基是实验室薄口螨的最适培养基袁将实验室薄口螨缘对渊缘意袁缘冤接种于玉米粉培养基上袁对其生长和数量增长情况进行观察计数袁每天观察一次袁连续圆园凿袁结果如图员所示遥图员摇实验室薄口螨在玉米粉培养基培养圆园凿的数量增长情况云蚤早援员摇栽澡藻早则燥憎贼澡燥枣匀蚤泽贼蚤燥泽贼燥皂葬造葬遭燥则葬贼燥则蚤怎皂蚤灶责燥憎凿藻则糟燥则灶皂藻凿蚤怎皂摇摇摇新接种的成螨在猿凿后产下较多的卵袁根据黄国城等咱圆暂的观察袁实验室薄口螨的平均历时为猿郾园耀源郾缘凿袁我们观察到的结果也基本一致遥从第一代卵出现猿凿后袁培养基表面可看到数量较多的第一若螨和第三若螨袁源耀缘凿后有少量新生第一代成螨出现遥圆周后可看到螨体数量急剧增加袁包括幼螨尧第一若螨尧第三若螨和成螨渊图员冤袁大量若螨的出现主要是由第二代成螨产生的卵所形成的袁由于第二代成螨数量比第一代成螨数量多得多袁使这一阶段的卵尧幼螨尧第一若螨和第三若螨数量急剧增加遥到第员怨天和圆园天的时候袁随着螨体数量的增加袁代谢废物增加袁环境容量有限袁若螨数量达到最高值遥这时统计若螨和成螨的数量袁可以粗略估计实验室薄口螨的繁殖率遥由于在统计过程中袁螨体数量过大难于计数袁可以将一个直径员糟皂的圆形小皮圈放入培养皿中袁先统计出小皮圈面积内的螨体数量袁再乘以培养皿面积是小皮圈面积的倍数来估算螨体总数遥例如袁我们在实体显微镜下观察一个生长有螨体的培养皿袁统计其螨体数量袁其若螨数量为员源园怨园只袁成螨数量为愿猿远只袁其中半数成螨为雌性渊源员愿只冤袁据此计算袁实验室薄口螨的繁殖率大约为员源园怨园辕源员愿越猿猿郾源只若螨辕每对成螨袁由于在对若螨进行点数时有遗漏现象袁所以实验室薄口螨的繁殖率要高于此数值遥培养员怨耀圆园凿时成螨是最活跃的时期袁数量也相对较多袁可用接种针或接种铲将成螨逐个挑出袁收集于员郾缘皂造的离心管中进行阅晕粤提取等后续研究遥当螨体数量达到最高值以后袁生存环境逐渐恶化袁部分满体开始死亡袁需要及时进行转接培养遥该螨在月再软琼脂培养基上也能够生长繁殖袁但与玉米粉培养基相比较袁生长速度下降袁生活周期延长袁约员缘凿左右完成一个周期袁比在玉米粉培养基中的生长周期渊源郾缘凿冤延长了近员园凿的时间遥生长缓慢的主要原因是月再软琼脂培养基比较稀软袁螨体不能浮于表面袁呼吸困难所造成遥利用月再软琼脂培养基进行实验室薄口螨的培养袁能够很方便地收集到大量较源期赵晓平等院实验室薄口螨的大量培养及休眠体的诱导窑源缘摇摇摇窑为干净的螨体袁收集过程大体如下院经过将近圆周的培养后袁月再软琼脂培养基中含有数量较多的螨体袁这时袁可以利用无菌生理盐水把含有螨体的月再软琼脂培养基在培养皿中进行稀释袁将培养皿在实体显微镜的小底盘上顺着一个方向做缓慢的水平旋转运动袁螨体就会全部集中到培养皿的中央袁用吸管将螨体吸到另一个培养皿中袁继续用无菌生理盐水进行洗涤袁反复多次袁就可以收集到大量的干净螨体袁进行后续研究遥用该方法收集到的螨体比利用玉米粉培养基收集到的螨体要干净袁因为在洗涤过程中月再培养基的沉淀较少遥利用月再培养基的另一个作用是袁可以使实验室薄口螨的培养同步化袁接种单个成体螨于月再软琼脂培养基中袁在圆缘益条件下培养袁成螨的产卵尧幼螨和若螨的形成可以同步化袁有利于分析每一阶段的个体发育和基因表达状况遥而在用玉米粉培养基培养时袁实验室薄口螨的生长速度较快袁世代重叠较多袁不同阶段的螨体混杂到一起袁所以不能实现同步化遥利用不加琼脂的液体状月再培养液对实验室薄口螨进行培养袁实验室薄口螨不能够进行继代生长袁但是可以产生大量的卵渊图圆冤袁可以把卵收集起来进行单独研究遥在玉米粉培养基上袁由于不同生活阶段的螨体混杂到一起袁难以单独分离到卵遥图圆摇漂浮在月再培养液表面的卵渊猿园伊冤云蚤早援圆摇栽澡藻燥增葬蚤灶月再糟怎造贼怎则藻造蚤择怎蚤凿摇圆郾圆摇休眠体的形成和诱导圆郾圆郾员摇果蝇培养指管中休眠体的形成摇孳生于培养果蝇的玻璃指管中的第一若螨在诸如培养基较为干燥尧螨的密度增大尧培养基被霉菌轻度污染尧温度较低渊员园耀员缘益冤等不利条件下袁就会转化为休眠体且数量逐步增加遥实体显微镜下可以观察到所形成的休眠体在玻璃指管内壁上不停地爬动袁用毛笔将运动于玻璃指管内壁上的休眠体粉刷到小培养皿中袁用乙醚轻度麻醉袁镜下清点休眠体的数目袁多者可以达到猿远圆只遥休眠体在内管壁上爬动的过程中寻找吸附对象袁当遇到果蝇时袁就会利用其身体腹部末端的吸盘吸附到果蝇身体表面各处袁尤其以吸附于果蝇腹部和胸部的数量最多遥将吸附有休眠体的果蝇转移到直径远糟皂的小培养皿中袁轻度麻醉后统计每只果蝇携带休眠体的数目袁吸附较多者其休眠体数量有苑远只渊图猿冤袁一部图猿摇几十个休眠体吸附于果蝇身体表面渊猿园伊冤云蚤早援猿摇阅燥扎藻灶泽燥枣澡赠责燥责蚤葬凿泽燥则遭蚤灶早燥灶贼燥阅则燥泽燥责澡蚤造葬皂藻造葬灶燥早葬泽贼藻则摇图源摇在月再培养液表面形成的休眠体渊猿园伊冤云蚤早援源摇栽澡藻澡赠责燥责蚤蚤灶月再糟怎造贼怎则藻造蚤择怎蚤凿窑源远摇摇摇窑动物学杂志悦澡蚤灶藻泽藻允燥怎则灶葬造燥枣在燥燥造燥早赠源远卷分休眠体以该种方式借助于果蝇在不同的培养管间进行传播袁另一部分未吸附于果蝇的休眠体可以通过培养管的棉塞或在实验人员对果蝇转接时进行传播遥圆郾圆郾圆摇较高温度下培养基逐步失去水分诱导休眠体形成摇调节培养箱的室内温度于猿园耀猿缘益袁把培养基中具有大批处在第一若螨阶段的培养皿放置于培养箱中袁经过猿耀缘凿的诱导袁在培养基的表面可以看到近猿园园耀源园园个灰黄色的星点状休眠体袁这些休眠体逐渐从培养基中运动到培养皿盖的内表面袁用毛笔刷扫培养皿盖的内表面袁把休眠体收集到离心管或其他密闭的小容器中袁可进行相关的研究遥圆郾圆郾猿摇较低温度诱导休眠体的形成摇较低的温度条件也可以诱导休眠体的形成袁当把生长有大批实验室薄口螨的培养皿或培养指管放置在较低温度渊员园耀员缘益冤的生化培养箱中袁愿耀员园凿后袁第一若螨逐步转化为休眠体遥收集并清点一个培养皿中的休眠体袁其数量为员圆远个遥低温诱导与较高温度诱导的最大不同是袁低温条件下该螨的生长速度下降袁休眠体的转化形成也相对较慢袁时间较长袁不易在短期内收集到大量的休眠体遥圆郾圆郾源摇利用月再培养液诱导休眠体的形成摇在月再培养液中袁由于实验室薄口螨不能很好地呼吸袁以及与玉米粉培养基相比较营养差异较大袁所以实验室薄口螨成螨尽管在月再培养液中能够产卵袁卵能发育为第一若螨袁而第一若螨几乎全部转化成休眠体渊图源冤遥在月再培养液中袁上百个休眠体形成后袁漂浮到培养液的表面袁用吸管把下面的培养液吸去袁就能方便地收集到休眠体遥猿摇讨摇论猿种不同的培养基可以培养实验室薄口螨袁其中袁最适培养基是玉米粉培养基袁当若螨数量达到最高值时袁利用若螨数量与成螨数量的一半作比值可以粗略估计实验室薄口螨的繁殖率袁其繁殖率大约等于猿猿郾源只若螨辕每对成螨曰利用月再软琼脂培养基可以收集到大量干净的螨体曰通过月再培养液可以较多地收集到实验室薄口螨的卵曰较高温度渊猿园耀猿缘益冤培养基逐步干燥尧较低温度渊员园耀员缘益冤尧月再液体培养可以诱导该螨休眠体的形成遥实验室薄口螨生长速度快袁短期培养可以产生大量子代袁个体收集容易袁对其进行深入研究袁可以为其他螨类的研究提供重要的参考价值袁也有可能成为螨类研究的代表性生物遥休眠体诱导的大量形成袁为研究生活史中具有休眠体阶段的螨类尧休眠体形成的分子机制和发育的遗传调控创造了条件袁有关该方面的工作还有待于进一步深入研究遥参摇考摇文摇献咱员暂摇王敦清袁黄国城袁郑强援果蝇饲养中的一种害螨要要要实验室食菌螨院渊蜱螨亚纲院食菌螨科冤援福建农业大学学报院自然科学版袁员怨怨源袁圆猿渊猿冤院猿圆源原猿圆远郾咱圆暂摇黄国城袁郑强袁王敦清援实验室食菌螨的生活史及对果蝇繁殖的危害援昆虫知识袁员怨怨缘袁猿圆渊缘冤院圆愿苑原圆愿怨郾咱猿暂摇李雅轩袁赵昕援遗传学综合实验援北京院科学出版社袁圆园园远院圆猿远郾