移植阿丽克丝·布莱肯瑞吉

中国肿瘤生物治疗杂志摇澡贼贼责:辕辕憎憎憎援遭蚤燥贼澡藻则援燥则早悦澡蚤灶允悦葬灶糟藻则月蚤燥贼澡藻则,酝葬则援圆园员苑,灾燥造援圆源,晕燥援猿阅韵陨:员园援猿愿苑圆辕躁援蚤泽泽灶援员园园苑鄄猿愿缘载援圆园员苑援园源援园园怨·基础研究·小干扰砸晕粤沉默悦载悦砸源和悦载悦砸苑对人子宫内膜癌陨泽澡蚤噪葬憎葬细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用叶园英圆,黄煜员,圆,颜莉莉圆,赵淑萍员,圆,张磊员,圆(员援青岛市妇女儿童医院妇科,山东青岛圆远远园园园;圆援青岛大学医学部,山东青岛圆远远园园园)[基金项目]摇山东省优秀中青年科学家科研奖励基金资助项目(晕燥援月杂圆园园怨杂宰园园圆),山东省自然科学基金资助项目(晕燥援在砸圆园员猿匀酝园员圆).
孕则燥躁藻糟贼泽怎责责燥则贼藻凿遭赠贼澡藻杂糟蚤藻灶贼蚤枣蚤糟砸藻泽藻葬则糟澡云燥怎灶凿葬贼蚤燥灶燥枣杂澡葬灶凿燥灶早孕则燥增蚤灶糟藻枣燥则韵怎贼泽贼葬灶凿蚤灶早再燥怎灶早杂糟蚤藻灶贼蚤泽贼粤憎葬则凿(晕燥援月杂圆园园怨杂宰园园圆),葬灶凿贼澡藻晕葬贼鄄怎则葬造杂糟蚤藻灶糟藻云燥怎灶凿葬贼蚤燥灶燥枣杂澡葬灶凿燥灶早孕则燥增蚤灶糟藻(晕燥援在砸圆园员猿匀酝园员圆)[作者简介]摇叶园英(员怨愿怨原),女,硕士生,研究从事妇科肿瘤的研究.
现工作单位:江西省妇幼保健院,耘鄄皂葬蚤造:赠藻赠怎葬灶赠枣噪岳员远猿援糟燥皂[通信作者]摇黄煜(匀哉粤晕郧再怎,糟燥则则藻泽责燥灶凿蚤灶早葬怎贼澡燥则),博士,教授,硕士生导师,主要从事妇科肿瘤和生殖内分泌基础和临床研究,耘鄄皂葬蚤造:澡怎葬灶早赠怎择凿岳员圆远援糟燥皂[优先发表]摇[摘摇要]摇目的:探讨针对趋化因子受体基因悦载悦砸源和悦载悦砸苑的小干扰砸晕粤(泽蚤砸晕粤)对人子宫内膜癌陨泽澡蚤噪葬憎葬细胞裸鼠移植瘤生长的影响.
方法:将子宫内膜癌陨泽澡蚤噪葬憎葬细胞株注射于裸鼠肩胛背部皮下建立动物模型,待肿瘤最长径达缘耀苑皂皂后,将所有荷瘤裸鼠随机分组,分别给予悦载悦砸源鄄泽蚤砸晕粤和悦载悦砸苑鄄泽蚤砸晕粤单独或联合瘤体内注射,并以阴性对照泽蚤砸晕粤和生理盐水作为对照组,每猿凿治疗一次,共远个治疗周期.
观察各组裸鼠移植瘤的生长,比较各组移植瘤的体积和质量的差异,并以实时荧光定量砸栽鄄孕悦砸、宰藻泽贼藻则灶遭造燥贼贼蚤灶早和免疫组化技术验证悦载悦砸源和悦载悦砸苑的基因沉默效果.
结果:成功建立陨泽澡蚤噪葬憎葬细胞裸鼠移植瘤模型,与阴性对照泽蚤砸晕粤组和空白对照组相比,悦载悦砸源泽蚤砸晕粤治疗组、悦载悦砸鄄泽蚤砸晕粤治疗组和悦载鄄悦砸源鄄泽蚤砸晕粤垣悦载悦砸苑鄄泽蚤砸晕粤治疗组的肿瘤的生长均明显受到抑制(均孕约园援园缘);悦载悦砸源鄄泽蚤砸晕粤和辕或悦载悦砸苑鄄泽蚤砸晕粤瘤体内直接注射能显著下调悦载悦砸源、悦载悦砸苑皂砸晕粤(均孕约园援园缘)和蛋白(均孕约园援园员)的表达.
结论:泽蚤砸晕粤干扰悦载悦砸源和悦载悦砸苑表达能够有效抑制人子宫内膜癌陨泽澡蚤噪葬憎葬细胞裸鼠移植瘤的生长.
[关键词]摇泽蚤砸晕粤;悦载悦砸源;悦载悦砸苑;子宫内膜癌;裸鼠[中图分类号]摇砸猿怨圆援员圆摇摇摇摇[文献标识码]摇粤摇摇摇摇[文章编号]摇员园园苑鄄猿愿缘载(圆园员苑)园源鄄园圆缘愿鄄园缘陨灶澡蚤遭蚤贼蚤燥灶藻枣枣藻糟贼燥枣泽蚤砸晕粤泽蚤造藻灶糟蚤灶早悦载悦砸源葬灶凿悦载悦砸苑燥灶贼澡藻早则燥憎贼澡燥枣陨泽澡蚤噪葬鄄憎葬糟藻造造曾藻灶燥早则葬枣贼泽蚤灶灶怎凿藻皂蚤糟藻再耘再怎葬灶赠蚤灶早圆,匀哉粤晕郧再怎员,圆;再粤晕蕴蚤造蚤圆;在匀粤韵杂澡怎责蚤灶早员,圆;在匀粤晕郧蕴藻蚤员,圆(员援阅藻责葬则贼皂藻灶贼燥枣郧赠灶藻糟燥造燥早赠,匝蚤灶早凿葬燥宰燥皂藻灶葬灶凿悦澡蚤造凿则藻灶忆泽匀燥泽责蚤贼葬造,匝蚤灶早凿葬燥圆远远园园园,杂澡葬灶凿燥灶早,悦澡蚤灶葬;圆援酝藻凿蚤糟葬造糟燥造造藻早藻,匝蚤灶早凿葬燥哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠,匝蚤灶早凿葬燥圆远远园园园,杂澡葬灶凿燥灶早,悦澡蚤灶葬)[粤遭泽贼则葬糟贼]摇韵遭躁藻糟贼蚤增藻:栽燥藻增葬造怎葬贼藻贼澡藻藻枣枣藻糟贼燥枣泽皂葬造造蚤灶贼藻则枣藻则蚤灶早砸晕粤(泽蚤砸晕粤)燥枣悦载悦砸源葬灶凿悦载悦砸苑燥灶贼澡藻早则燥憎贼澡燥枣藻灶凿燥皂藻贼则蚤葬造糟葬灶糟藻则(耘悦)陨泽澡蚤噪葬憎葬糟藻造造泽曾藻灶燥早则葬枣贼泽蚤灶灶怎凿藻皂蚤糟藻援酝藻贼澡燥凿泽:耘悦陨泽澡蚤噪葬憎葬糟藻造造泽憎藻则藻泽怎遭糟怎贼葬灶藻燥怎泽造赠蚤灶躁藻糟鄄贼藻凿蚤灶贼燥贼澡藻则蚤早澡贼枣造葬灶噪燥枣灶怎凿藻皂蚤糟藻贼燥藻泽贼葬遭造蚤泽澡葬灶蚤皂葬造曾藻灶燥早则葬枣贼皂燥凿藻造援宰澡藻灶贼澡藻凿蚤葬皂藻贼藻则燥枣贼怎皂燥则泽则藻葬糟澡藻凿缘原苑皂皂,葬造造贼怎皂燥则鄄遭藻葬则蚤灶早皂蚤糟藻憎藻则藻则葬灶凿燥皂造赠凿蚤增蚤凿藻凿蚤灶贼燥枣蚤增藻早则燥怎责泽,葬灶凿贼则藻葬贼藻凿憎蚤贼澡蚤灶贼则葬原贼怎皂燥则蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶燥枣悦载悦砸源鄄泽蚤砸晕粤,悦载悦砸苑鄄泽蚤砸晕粤,悦载悦砸源鄄泽蚤砸晕粤垣悦载悦砸苑鄄泽蚤砸晕粤,灶藻早葬贼蚤增藻鄄泽蚤砸晕粤,葬灶凿灶燥则皂葬造泽葬造蚤灶藻,则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠援郧则燥憎贼澡燥枣曾藻灶燥鄄早则葬枣贼泽憎葬泽燥遭泽藻则增藻凿,葬灶凿贼澡藻凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻泽蚤灶增燥造怎皂藻葬灶凿憎藻蚤早澡贼燥枣曾藻灶燥早则葬枣贼泽葬皂燥灶早枣蚤增藻早则燥怎责泽憎藻则藻藻曾葬皂蚤灶藻凿援悦载悦砸源葬灶凿悦载悦砸苑藻曾责则藻泽泽蚤燥灶泽蚤灶贼怎皂燥则曾藻灶燥早则葬枣贼泽憎藻则藻凿藻贼藻糟贼藻凿遭赠匝怎葬灶贼蚤贼葬贼蚤增藻砸藻增藻则泽藻栽则葬灶泽糟则蚤责贼蚤燥灶孕燥造赠皂藻则葬泽藻悦澡葬蚤灶砸藻葬糟贼蚤燥灶(匝砸栽鄄孕悦砸),宰藻泽贼藻则灶遭造燥贼贼蚤灶早葬灶凿陨皂皂怎灶燥澡蚤泽贼燥糟澡藻皂蚤糟葬造栽藻糟澡灶蚤择怎藻,则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠援砸藻泽怎造贼泽:陨泽澡蚤噪葬憎葬糟藻造造泽曾藻灶燥早则葬枣贼皂燥凿藻造蚤灶灶怎凿藻皂蚤糟藻憎葬泽泽怎糟糟藻泽泽枣怎造造赠糟燥灶泽贼则怎糟贼藻凿援栽澡藻早则燥憎贼澡燥枣贼怎皂燥则曾藻灶燥早则葬枣贼泽蚤灶悦载悦砸源泽蚤砸晕粤早则燥怎责,悦载悦砸鄄泽蚤砸晕粤早则燥怎责葬灶凿悦载悦砸源鄄泽蚤砸晕粤垣悦载悦砸苑鄄泽蚤砸晕粤早则燥怎责憎藻则藻泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠蚤灶澡蚤遭蚤贼藻凿,糟燥皂责葬则藻凿憎蚤贼澡贼澡燥泽藻蚤灶灶藻早葬贼蚤增藻糟燥灶贼则燥造葬灶凿·园园猿·叶园英,等援小干扰砸晕粤沉默悦载悦砸源和悦载悦砸苑对人子宫内膜癌陨泽澡蚤噪葬憎葬细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用遭造葬灶噪糟燥灶贼则燥造早则燥怎责(葬造造孕约园援园缘)援栽澡藻皂砸晕粤(孕约园援园缘)葬灶凿责则燥贼藻蚤灶(孕约园援园员)藻曾责则藻泽泽蚤燥灶泽燥枣悦载悦砸源葬灶凿悦载悦砸苑憎藻则藻泽贼葬贼蚤泽贼蚤糟葬造造赠凿燥憎灶原则藻早怎造葬贼藻凿遭赠凿蚤则藻糟贼造赠蚤灶躁藻糟贼蚤灶早泽蚤砸晕粤蚤灶贼燥曾藻灶燥早则葬枣贼泽援悦燥灶糟造怎泽蚤燥灶:泽蚤砸晕粤蚤灶贼藻则枣藻则蚤灶早悦载悦砸源葬灶凿悦载悦砸苑糟燥怎造凿藻枣枣藻糟贼蚤增藻造赠泽怎责责则藻泽泽贼澡藻早则燥憎贼澡燥枣澡怎皂葬灶耘悦陨泽澡蚤噪葬憎葬曾藻灶燥早则葬枣贼泽蚤灶灶怎凿藻皂蚤糟藻援[运藻赠憎燥则凿泽]摇泽皂葬造造蚤灶贼藻则枣藻则蚤灶早砸晕粤(泽蚤砸晕粤),悦载悦砸源,悦载悦砸苑,耘灶凿燥皂藻贼则蚤葬造糟葬则糟蚤灶燥皂葬,灶怎凿藻皂燥怎泽藻[悦澡蚤灶允悦葬灶糟藻则月蚤燥贼澡藻则,圆园员苑,圆源(源):猿缘怨鄄猿远猿援阅韵陨:员园援猿愿苑圆辕躁援蚤泽泽灶援员园园苑鄄猿愿缘载援圆园员苑援园源援园园愿]摇摇摇摇子宫内膜癌(藻灶凿燥皂藻贼则蚤葬造糟葬灶糟藻则,耘悦)是最常见的妇科恶性肿瘤之一,多发生于绝经后妇女.
近年来,年轻女性耘悦的发病率呈现上升趋势,在发达国家,其死亡率仅次于卵巢癌.
大量研究[员鄄远]表明,悦载悦砸源和悦载悦砸苑高表达于包括耘悦在内的多种恶性肿瘤组织,在肿瘤的发生发展过程中发挥着极其重要的作用.
本课题组前期体外实验研究中,发现利用小干扰砸晕粤(泽蚤砸晕粤)沉默人耘悦细胞株中悦载悦砸源和悦载悦砸苑的基因表达后能够明显抑制肿瘤细胞的增殖和侵袭能力[苑].
在本实验中,采用肿瘤细胞悬液接种法建立人耘悦移植瘤动物模型,对移植瘤进行局部单独或联合注射悦载悦砸源鄄泽蚤砸晕粤和悦载悦砸苑鄄泽蚤砸晕粤,并检测各组移植瘤内悦载悦砸源和悦载鄄悦砸苑皂砸晕粤及蛋白表达水平,观察悦载悦砸源鄄泽蚤砸晕粤和悦载悦砸苑鄄泽蚤砸晕粤对人耘悦裸鼠移植瘤生长的影响.
员摇材料与方法员援员摇材料和主要试剂耘悦陨泽澡蚤噪葬憎葬细胞购自青岛大学附属医院中心实验室.
杂孕云级雌性月粤蕴月辕糟裸鼠(源耀缘周龄,体质量员远耀员愿早)猿园只购自北京维通利华实验动物技术有限公司[杂悦载运(京)圆园员圆鄄园园园员].
悦载悦砸源和悦载悦砸苑孕悦砸引物由上海生工生物工程有限公司合成.
逆转录试剂盒和荧光定量试剂盒均购自日本栽葬运葬砸葬公司.
兔抗人悦载悦砸源单克隆抗体、兔抗人悦载悦砸苑(砸阅悦鄄员)多克隆抗体、兔抗人郧粤孕阅匀单克隆抗体均购自英国粤遭糟葬皂公司;匀砸孕标记的二抗孕灾鄄远园园员购自中杉金桥生物有限公司.
靶向针对悦载悦砸源和悦载悦砸苑基因的化学修饰泽蚤砸晕粤由广州市锐博生物科技有限公司设计合成,分别命名为:悦载鄄悦砸源鄄泽蚤砸晕粤和悦载悦砸苑鄄泽蚤砸晕粤,另设计阴性对照泽蚤砸鄄晕粤序列,经月蕴粤杂栽检索证实与已知的其他基因序列无关.
员援圆摇人耘悦裸鼠移植瘤动物模型的建立及实验分组取对数生长期的陨泽澡蚤噪葬憎葬细胞,胰酶消化后适量孕月杂重悬细胞并进行细胞计数,制成肿瘤细胞浓度为缘伊员园苑辕皂造的单细胞悬液,无菌条件下抽取园援圆皂造接种于每只裸鼠右侧肩胛背部皮下.
每猿凿测量肿瘤的最长径葬和最短径遭,待肿瘤最长径长至缘耀苑皂皂时,将所有荷瘤裸鼠进行随机分为缘组(每组远只):悦载悦砸源鄄泽蚤砸晕粤治疗组;悦载悦砸苑鄄泽蚤砸晕粤治疗组;悦载悦砸源辕悦载悦砸苑鄄泽蚤砸晕粤治疗组;阴性对照组;生理盐水组(空白对照组).
采用移植瘤体内直接注射法,各组中每只裸鼠分别注射悦载悦砸源鄄泽蚤砸晕粤(缘灶皂燥造)、悦载悦砸苑鄄泽蚤砸晕粤(缘灶皂燥造)、悦载悦砸源鄄泽蚤砸晕粤(缘灶皂燥造)垣悦载悦砸苑鄄泽蚤砸晕粤(缘灶皂燥造)、晕藻早葬贼蚤增藻鄄泽蚤砸晕粤(缘灶皂燥造)和生理盐水,注射体积均为缘园μ造,每猿凿注射一次,共远个治疗周期.
员援猿摇人耘悦裸鼠移植瘤生长日的观察观察各分组肿瘤生长情况,每猿凿用游标卡尺记录肿块的长径葬和短径遭,按公式(灾越葬遭圆辕圆)计算肿瘤体积的大小,并绘制出肿瘤体积生长曲线.
计算肿瘤生长抑制率:治疗周期结束后处死裸鼠,剥离肿瘤,电子称称得各肿瘤质量,抑制率(豫)越(对照组平均瘤重原治疗组平均瘤重)辕对照组平均瘤重伊员园园豫.
员援源摇杂再月砸郧砸耘耘晕实时荧光定量砸栽鄄孕悦砸检测移植瘤组织中悦载悦砸源和悦载悦砸苑皂砸晕粤的表达采用栽砸陨扎燥造法提取各组移植瘤组织中总砸晕粤,按照逆转录试剂盒说明书进行反转录合成糟阅晕粤.
目的基因悦载悦砸源的上游引物为缘忆鄄栽悦粤栽悦粤粤郧悦粤粤郧郧郧栽郧栽郧粤郧鄄猿忆,下游引物为缘忆鄄栽郧郧悦栽悦悦粤粤郧郧粤粤粤郧悦粤栽粤郧鄄猿忆;目的基因悦载悦砸苑的上游引物为缘忆鄄粤郧悦粤郧悦粤郧郧粤郧郧粤粤郧粤栽郧郧栽鄄猿忆,下游引物为缘忆鄄栽悦栽悦粤栽栽郧栽栽郧郧粤悦郧悦粤郧粤悦鄄猿忆;内参基因郧粤孕阅匀的上游引物为缘忆鄄悦栽悦粤郧粤悦粤悦悦粤栽郧郧郧郧粤粤郧郧栽郧粤鄄猿忆,下游引物为缘忆鄄粤栽郧粤栽悦栽栽郧粤郧郧悦栽郧栽栽郧栽悦粤栽粤鄄猿忆.
应用云栽悦鄄猿园园园溶解曲线分析仪进行测定,仪器自动计算出目的基因悦载悦砸源和悦载悦砸苑与内参基因郧粤孕阅匀的悦贼值(悦贼值为循环阈值),采用圆鄄ΔΔ悦贼方法计算目的基因的相对表达量.
Δ悦贼值越目的基因(悦载悦砸源或悦载悦砸苑)悦贼值原郧粤孕阅匀基因悦贼值;ΔΔ悦贼越各处理组的Δ悦贼值原对照组的Δ悦贼值,以空白对照组为对照.
员援缘摇宰藻泽贼藻则灶遭造燥贼贼蚤灶早检测移植瘤组织中悦载悦砸源和悦载悦砸苑蛋白的表达常规方法提取移植瘤组织中总蛋白,制备员圆豫·员园猿·中国肿瘤生物治疗杂志,圆园员苑年源月,圆源(源)杂阅杂鄄孕粤郧耘凝胶,经电泳、转膜、封闭后,加入兔抗人悦载悦砸源(员颐员园园稀释)、兔抗人悦载悦砸苑(员颐圆缘园稀释)或兔抗人郧粤孕阅匀(员颐员园园园园稀释)抗体于源益孵育过夜.
次日栽月杂栽洗涤猿次后,加入匀砸孕标记的二抗在室温条件下反应员澡,再用栽月杂栽洗涤后,使用耘悦蕴化学发光液法检测目的条带.
采用匝怎葬灶贼蚤贼赠韵灶藻源援远软件分析,以悦载悦砸源辕郧粤孕阅匀和悦载悦砸苑辕郧粤孕阅匀条带的灰度值之比表示目的蛋白的相对表达水平.
实验重复猿次.
员援远摇免疫组化技术检测耘悦移植瘤组织中悦载悦砸源和悦载悦砸苑蛋白的表达在剖取移植瘤后立即切取部分瘤组织块(厚度约猿皂皂)置于源豫甲醛溶液中固定,常规脱水、浸蜡、包埋.
石蜡标本猿皂皂切片(源μ皂厚),远源益烤片员澡,常规脱蜡水化后将切片置于责匀越远援园枸橼酸盐怨愿益热修复圆园皂蚤灶,然后浸泡于猿豫的过氧化氢溶液中封闭内源性过氧化物酶员园皂蚤灶.
先滴加一抗(兔抗人悦载悦砸源或兔抗人悦载悦砸苑抗体),猿苑益温箱孵育员澡,栽月杂栽洗涤猿次后再滴加匀砸孕标记的二抗孕灾鄄远园园员,猿苑益温箱孵育猿园皂蚤灶;阅粤月显色员皂蚤灶;苏木素复染缘皂蚤灶,常规脱水封片.
如上步骤完成免疫组化染色后将切片放置于韵造赠皂责怎泽悦载猿员型(韵造赠皂责怎泽公司,日本)显微镜的高倍镜下观察并采集图片,采用陨皂葬早藻鄄孕则燥责造怎泽缘援员软件分析图像,每张切片随机选取缘个高倍镜视野(伊源园园),测量每个视野下悦载悦砸源或悦载悦砸苑表达阳性细胞的平均光密度值(粤阅).
员援苑摇统计学处理实验数据采用杂孕杂杂员怨援园软件分析,计量数据均表示为珋曾依泽,多组间比较采用单因素方差分析,两组间差异比较采用贼检验,以孕约园援园缘表示差异具有统计学意义.
圆摇结摇果圆援员摇干扰悦载悦砸源、悦载悦砸苑抑制人耘悦裸鼠移植瘤的生长各分组的荷瘤裸鼠在治疗周期开始时肿瘤体积相对均衡,差异无统计学意义(孕跃园援园缘).
经不同治疗方法处理后,全部裸鼠均未出现意外死亡现象,所有移植瘤瘤体表面皮肤完整,无破溃缺损,治疗周期结束后处死各组荷瘤裸鼠,剥出肿瘤.
裸鼠移植瘤体积变化曲线(图员粤)显示,与阴性对照泽蚤砸晕粤组和空白对照组相比,猿个治疗组(悦载悦砸源泽蚤砸晕粤治疗组、悦载悦砸鄄泽蚤砸晕粤治疗组和悦载悦砸源鄄泽蚤砸晕粤垣悦载鄄悦砸苑鄄泽蚤砸晕粤治疗组)肿瘤的生长均明显受到抑制.
治疗周期结束后悦载悦砸源鄄泽蚤砸晕粤治疗组、悦载悦砸苑鄄泽蚤砸鄄晕粤治疗组和悦载悦砸苑鄄泽蚤砸晕粤治疗组移植瘤质量均显著小于阴性对照组和空白对照组[(园援源圆依园援员圆)、(园援源猿依园援员猿)、(园援源园依园援园愿)增泽(园援怨园依园援园怨)、(园援怨怨依园援员员)早,孕约园援园员],而两个对照组瘤体体积差异无统计学意义(孕跃园援园缘),各治疗组间差异也无统计学意义(孕跃园援园缘)(图员月).
圆援圆摇各治疗组的抑瘤率悦载悦砸源鄄泽蚤砸晕粤和悦载悦砸苑鄄泽蚤砸晕粤单独或联合治疗组瘤体重量均明显低于阴性对照组和空白对照组(孕约园援园员).
阴性对照组和空白对照组间比较,瘤质量差异无统计学意义(孕跃园援园缘).
相对于空白对照组,悦载悦砸源鄄泽蚤砸晕粤组、悦载悦砸苑鄄泽蚤砸晕粤组、悦载悦砸源辕悦载鄄悦砸苑鄄泽蚤砸晕粤组的抑瘤率分别为缘愿援苑苑豫、缘远援远员豫、缘缘郾愿缘豫,而阴性对照组瘤体注射抑瘤率仅为怨援圆源豫.
孕!
园援园员增泽糟燥灶贼则燥造早则燥怎责图员摇悦载悦砸源辕悦载悦砸苑鄄泽蚤砸晕粤对裸鼠移植瘤生长的影响云蚤早援员摇悦载悦砸源鄄泽蚤砸晕粤葬灶凿辕燥则悦载悦砸苑鄄泽蚤砸晕粤蚤灶澡蚤遭蚤贼贼怎皂燥则早则燥憎贼澡蚤灶增蚤增燥·圆园猿·叶园英,等援小干扰砸晕粤沉默悦载悦砸源和悦载悦砸苑对人子宫内膜癌陨泽澡蚤噪葬憎葬细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用圆援猿摇干扰悦载悦砸源、悦载悦砸苑人耘悦裸鼠移植瘤内悦载悦砸源和悦载悦砸苑皂砸晕粤的表达实时荧光定量孕悦砸检测结果(图圆)表明,悦载悦砸源鄄泽蚤砸晕粤治疗组和悦载悦砸源辕悦载悦砸苑鄄泽蚤砸晕粤治疗组与阴性对照组或空白对照组相比,悦载悦砸源皂砸晕粤[(园援猿愿依园援员缘)、(园援猿圆依园援园怨)增泽(员援员园依园郾源怨)、(员援园怨依园援源怨),孕约园援园员]及悦载悦砸苑皂砸晕粤[(园援源苑依园援员缘)、(园援缘圆依园援圆圆)增泽(员援园缘依园援圆苑)、(员援园苑依园援源圆),孕约园援园员]的表达均明显下调,而两个对照组间悦载悦砸源和悦载悦砸苑皂砸晕粤表达差异均无统计学意义(孕跃园援园缘).
圆援源摇干扰悦载悦砸源、悦载悦砸苑降低人耘悦裸鼠移植瘤悦载悦砸源和悦载悦砸苑蛋白的表达宰藻泽贼藻则灶遭造燥贼贼蚤灶早法检测各组裸鼠肿瘤组织中悦载悦砸源和悦载悦砸苑蛋白的表达,结果(图猿)显示,与对照组相比,悦载悦砸源鄄泽蚤砸晕粤和悦载悦砸源辕悦载悦砸苑鄄泽蚤砸晕粤治疗组移植瘤组织的悦载悦砸源表达被抑制(均孕约园郾园员),悦载悦砸苑鄄泽蚤砸晕粤和悦载悦砸源辕悦载悦砸苑鄄泽蚤砸晕粤治疗组移植瘤组织的悦载悦砸苑表达被抑制(均孕约园郾园员),而空白对照组及阴性对照组则有高水平的悦载悦砸源和悦载悦砸苑表达.
孕!
园援园缘增泽糟燥灶贼则燥造早则燥怎责图圆摇各组移植瘤组织中悦载悦砸源和悦载悦砸苑皂砸晕粤的表达量云蚤早援圆摇耘曾责则藻泽泽蚤燥灶悦载悦砸源辕悦载悦砸苑皂砸晕粤蚤灶藻葬糟澡早则燥怎责粤:悦载悦砸源鄄泽蚤砸晕粤;月:悦载悦砸苑鄄泽蚤砸晕粤;悦:悦载悦砸源辕悦载悦砸苑鄄泽蚤砸晕粤;阅:晕藻早葬贼蚤增藻鄄糟燥灶贼则燥造;耘:月造葬灶噪鄄糟燥灶贼则燥造孕!
园援园员增泽糟燥灶贼则燥造早则燥怎责图猿摇各组移植瘤组织中悦载悦砸源和悦载悦砸苑蛋白的表达量云蚤早援猿摇耘曾责则藻泽泽蚤燥灶悦载悦砸源辕悦载悦砸苑责则燥贼藻蚤灶蚤灶藻葬糟澡早则燥怎责摇摇免疫组化检测结果(图源)显示,悦载悦砸源主要在耘悦细胞质中表达,胞质着色;而悦载悦砸苑在耘悦细胞质和细胞膜上均有表达,阳性细胞的胞质和胞核染成棕黄色.
悦载悦砸源鄄泽蚤砸晕粤治疗组和悦载悦砸源辕悦载悦砸苑鄄泽蚤砸晕粤治疗组中悦载悦砸源的的平均光密度值(粤阅)明显低于阴性对照组和空白对照组,差异有显·猿园猿·中国肿瘤生物治疗杂志,圆园员苑年源月,圆源(源)著性统计学意义(均孕约园援园员);悦载悦砸苑鄄泽蚤砸晕粤治疗组和悦载悦砸源辕悦载悦砸苑鄄泽蚤砸晕粤治疗组中悦载悦砸苑的的平均光密度值(粤阅)明显低于两个对照组,差异有统计学意义(均孕约园援园员);而两个对照组之间差异无统计学意义.
各沉默组中相应基因的蛋白表达明显受到抑制,与宰藻泽贼藻则灶遭造燥贼贼蚤灶早检测结果一致.
粤:悦载悦砸源鄄泽蚤砸晕粤;月:悦载悦砸苑鄄泽蚤砸晕粤;悦:悦载悦砸源辕悦载悦砸苑鄄泽蚤砸晕粤;阅:晕藻早葬贼蚤增藻鄄糟燥灶贼则燥造;耘:月造葬灶噪鄄糟燥灶贼则燥造孕!
园援园员增泽糟燥灶贼则燥造早则燥怎责图源摇各组移植瘤组织中悦载悦砸源和悦载悦砸苑免疫组化染色结果云蚤早援源摇耘曾责则藻泽泽蚤燥灶悦载悦砸源辕悦载悦砸苑责则燥贼藻蚤灶蚤灶藻葬糟澡早则燥怎责枣则燥皂陨皂皂怎灶燥澡蚤泽贼燥糟澡藻皂蚤糟葬造泽贼葬蚤灶蚤灶早猿摇讨摇论悦载悦蕴员圆,亦称为基质细胞衍生因子鄄员(泽贼则燥皂葬造鄄凿藻则蚤增藻凿枣葬糟贼燥则鄄员,杂阅云鄄员),是趋化因子悦载悦家族成员之一.
早期研究认为,趋化因子受体悦载悦砸源是悦载悦蕴员圆的唯一受体,他们共同构成的悦载悦蕴员圆辕悦载鄄悦砸源趋化轴参与多种恶性肿瘤(如乳腺癌[圆]、卵巢癌[愿]、结肠癌[怨]和耘悦[员,员园]等)的生长、侵袭和转移过程.
然而,近期研究[员员]证实趋化因子悦载悦蕴员圆存在除悦载悦砸源外的另一受体砸阅悦员,命名为悦载悦砸苑.
与悦载悦蕴员圆辕悦载悦砸源趋化轴一样,悦载悦蕴员圆辕悦载悦砸苑趋化轴在肿瘤的发生、生长、血管形成、侵袭及转移过程中也起着极其重要的作用[缘鄄远,员圆鄄员源].
近年来,悦载悦蕴员圆及其受体悦载悦砸源和悦载悦砸苑受到越来越多学者的关注,国内外研究[员缘鄄员苑]已证实,应用悦载悦砸源和悦载悦砸苑的抑制剂或针对这两种基因的泽蚤砸晕粤可以使肿瘤细胞的增殖和侵袭能力下降,显著抑制肿瘤的生长.
王立文等[员愿]研究发现,靶向沉默非小细胞肺癌吉西他滨耐药株(粤缘源怨辕郧藻皂)中悦载悦砸源的基因表达后可以逆转癌细胞对吉西他滨的耐药性.
另外,有研究[员怨]已经证实趋化因子受体悦载悦砸源和悦载悦砸苑在耘悦组织中的表达明显高于癌旁组织或正常子宫内膜组织,表明趋化因子受体悦载悦砸源和悦载悦砸苑与耘悦的发生发展密切相关.
但是,他们在耘悦微环境中发挥作用的具体机制尚不明确,悦载悦砸源和悦载悦砸苑相关制剂的抗肿瘤治疗研究仍处于动物实验研究阶段,距离真正应用于临床治疗还需很长一段时间.
因此,特异性抑制肿瘤细胞或组织中悦载悦砸源和悦载悦砸苑基因的表达可能是研究相关肿瘤的发生机制及评价相关制剂抗肿瘤疗效的极为有效的研究方法.
在前期工作中,本课题组已经证实了通过下调悦载悦砸源和悦载悦砸苑的表达可以显著抑制人耘悦细胞株的体外增殖和侵袭能力,并发生杂期阻滞[苑].
但体外实验只能部分模拟肿瘤细胞的生物学行为,主要反映肿瘤细胞自身的增殖潜能和侵袭能力.
相比于体外实验,在裸鼠体内建立耘悦移植瘤模型可以模拟其在人体内的真实情况,是研究人·源园猿·叶园英,等援小干扰砸晕粤沉默悦载悦砸源和悦载悦砸苑对人子宫内膜癌陨泽澡蚤噪葬憎葬细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用耘悦更为直接且有效的实验方法.
本研究中,将人耘悦陨泽澡蚤噪葬憎葬细胞悬液接种于裸鼠右肩胛背部皮下,建立人耘悦裸鼠皮下移植瘤裸鼠模型,采用移植瘤体内直接注射悦载悦砸源鄄泽蚤砸晕粤和悦载悦砸苑鄄泽蚤砸晕粤,结果表明悦载悦砸源鄄泽蚤砸晕粤和悦载悦砸苑鄄泽蚤砸晕粤单独治疗组和联合治疗组移植瘤组织中悦载鄄悦砸源和悦载悦砸苑皂砸晕粤和蛋白表达受抑,相比于对照组,各治疗组肿瘤体积和质量也均有所减小,即瘤体内直接注射悦载悦砸源鄄泽蚤砸晕粤和悦载悦砸苑鄄泽蚤砸晕粤可以显著抑制人耘悦在裸鼠体内的生长,但二者联合沉默并不能产生更大的抑瘤效应,这可能与悦载悦砸源和悦载悦砸苑的功能作用相互干扰或者其在细胞内信号转导通路存在重叠有关.
综上,下调悦载悦砸源和悦载悦砸苑的表达可以显著抑制人耘悦细胞株的体外增殖和侵袭能力、发生杂期阻滞,同时可抑制陨泽澡蚤噪葬憎葬细胞裸鼠移植瘤的生长,因此悦载悦砸源和悦载悦砸苑有望成为耘悦基因治疗的潜在靶点之一.
[参考文献][员]摇郧耘蕴酝陨晕陨杂,酝粤晕郧韵晕陨酝,悦粤杂栽陨郧蕴陨韵晕耘云,藻贼葬造援栽澡藻悦载鄄悦砸源辕悦载悦蕴员圆葬曾蚤泽蚤灶藻灶凿燥皂藻贼则蚤葬造糟葬灶糟藻则[允]援悦造蚤灶耘曾责酝藻贼葬泽贼葬泽蚤泽,圆园园怨,圆远(猿):圆远员鄄圆远愿援阅韵陨:员园援员园园苑辕泽员园缘愿缘鄄园园怨鄄怨圆源园鄄源援[圆]摇杂哉晕再,酝粤韵载,云粤晕悦,藻贼葬造援悦载悦蕴员圆鄄悦载悦砸源葬曾蚤泽责则燥皂燥贼藻泽贼澡藻灶葬贼怎则葬造泽藻造藻糟贼蚤燥灶燥枣遭则藻葬泽贼糟葬灶糟藻则糟藻造造皂藻贼葬泽贼葬泽蚤泽[允]援栽怎皂燥则月蚤燥造,圆园员源,猿缘(愿):苑苑远缘鄄苑苑苑猿援阅韵陨:员园援员园园苑辕泽员猿圆苑苑鄄园员源鄄员愿员远鄄员援[猿]摇运韵杂匀陨月粤栽,匀韵杂韵栽粤晕陨砸,酝陨再粤酝韵栽韵再,藻贼葬造援耘曾责则藻泽泽蚤燥灶燥枣泽贼则燥皂葬造糟藻造造鄄凿藻则蚤增藻凿枣葬糟贼燥则员葬灶凿悦载悦砸源造蚤早葬灶凿则藻糟藻责贼燥则泽赠泽贼藻皂蚤灶责葬灶糟则藻葬贼蚤糟糟葬灶糟藻则:葬责燥泽泽蚤遭造藻则燥造藻枣燥则贼怎皂燥则责则燥早则藻泽泽蚤燥灶[允]援悦造蚤灶悦葬灶糟藻则砸藻泽,圆园园园,远(怨):猿缘猿园鄄猿缘猿缘援[源]摇酝韵晕晕陨耘砸允,月韵陨杂杂粤晕酝,蕴忆匀耘蕴郧韵哉粤蕴悦忆匀粤,藻贼葬造援悦载悦砸苑蚤泽怎责鄄则藻早怎造葬贼藻凿蚤灶澡怎皂葬灶葬灶凿皂怎则蚤灶藻澡藻责葬贼燥糟藻造造怎造葬则糟葬则糟蚤灶燥皂葬葬灶凿蚤泽泽责藻糟蚤枣蚤糟葬造造赠藻曾责则藻泽泽藻凿遭赠藻灶凿燥贼澡藻造蚤葬造糟藻造造泽[允]援耘怎则允悦葬灶糟藻则,圆园员圆,源愿(员):员猿愿鄄员源愿援阅韵陨:员园援员园员远辕躁援藻躁糟葬援圆园员员援园远援园源源援[缘]摇匀粤韵酝,在匀耘晕郧允,匀韵哉运,藻贼葬造援砸燥造藻燥枣糟澡藻皂燥噪蚤灶藻则藻糟藻责贼燥则悦载悦砸苑蚤灶遭造葬凿凿藻则糟葬灶糟藻则责则燥早则藻泽泽蚤燥灶[允]援月蚤燥糟澡藻皂孕澡葬则皂葬糟燥造,圆园员圆,愿源(圆):圆园源鄄圆员源援阅韵陨:员园援员园员远辕躁援遭糟责援圆园员圆援园源援园园苑援[远]摇在匀耘晕郧运,蕴陨匀再,杂哉载蕴,藻贼葬造援悦澡藻皂燥噪蚤灶藻则藻糟藻责贼燥则悦载悦砸苑则藻早怎造葬贼藻泽贼澡藻蚤灶增葬泽蚤燥灶,葬灶早蚤燥早藻灶藻泽蚤泽葬灶凿贼怎皂燥则早则燥憎贼澡燥枣澡怎皂葬灶澡藻责葬贼燥糟藻造造怎造葬则糟葬则糟蚤灶燥皂葬糟藻造造泽[允辕韵蕴]援允耘曾责悦造蚤灶悦葬灶糟藻则砸藻泽,圆园员园,圆怨(员):猿员[圆园员远鄄园苑鄄园圆]澡贼贼责泽:辕辕躁藻糟糟则援遭蚤燥皂藻凿糟藻灶贼则葬造援糟燥皂辕葬则贼蚤糟造藻泽辕员园援员员愿远辕员苑缘远鄄怨怨远远鄄圆怨鄄猿员援阅韵陨:员园援员员愿远辕员苑缘远鄄怨怨远远鄄圆怨鄄猿员援[苑]摇龙萍,刘萍萍,孙凤仪,等援砸晕粤干扰悦载悦砸源和悦载悦砸苑对子宫内膜癌匀耘悦鄄员鄄粤细胞生物学行为的影响[允]援中国肿瘤生物治疗杂志,圆园员缘(猿):猿员缘鄄猿圆员援阅韵陨:员园援猿愿苑圆辕躁援蚤泽泽灶援员园园苑鄄猿愿缘载援圆园员缘援猿援园园远援[愿]摇运粤允陨再粤酝粤匀,杂匀陨月粤栽粤运,栽耘砸粤哉悦匀陨酝,藻贼葬造援陨灶增燥造增藻皂藻灶贼燥枣杂阅云鄄员α辕悦载悦砸源葬曾蚤泽蚤灶贼澡藻藻灶澡葬灶糟藻凿责藻则蚤贼燥灶藻葬造皂藻贼葬泽贼葬泽蚤泽燥枣藻责蚤贼澡藻造蚤葬造燥增葬则蚤葬灶糟葬则糟蚤灶燥皂葬[允]援陨灶贼允悦葬灶糟藻则,圆园园愿,员圆圆(员):怨员鄄怨怨援阅韵陨:员园援员园园圆辕蚤躁糟援圆猿园愿猿援[怨]摇宰粤晕郧月,宰粤晕郧宰,晕陨哉宰,藻贼葬造援杂阅云鄄员辕悦载悦砸源葬曾蚤泽责则燥鄄皂燥贼藻泽凿蚤则藻糟贼蚤燥灶葬造皂蚤早则葬贼蚤燥灶燥枣糟燥造燥则藻糟贼葬造糟葬灶糟藻则糟藻造造泽贼澡则燥怎早澡怎责鄄则藻早怎造葬贼蚤燥灶燥枣蚤灶贼藻早则蚤灶α增β远[允]援悦葬则糟蚤灶燥早藻灶藻泽蚤泽,圆园员源,猿缘(圆):圆愿圆鄄圆怨员援阅韵陨:员园援员园怨猿辕糟葬则糟蚤灶辕遭早贼猿猿员援[员园]云耘蕴陨载粤杂,杂栽韵晕耘砸粤,悦匀陨灾哉运哉蕴粤酝,藻贼葬造援杂怎则增蚤增葬造燥怎贼鄄糟燥皂藻泽蚤灶藻灶凿燥皂藻贼则蚤葬造糟葬灶糟藻则责葬贼蚤藻灶贼泽葬则藻葬泽泽燥糟蚤葬贼藻凿憎蚤贼澡悦载悦蕴员圆葬灶凿藻泽贼则燥早藻灶则藻糟藻责贼燥则藻曾责则藻泽泽蚤燥灶[允]援陨灶贼允悦葬灶糟藻则,圆园员圆,员猿员(圆):耘员员源鄄耘员圆员援阅韵陨:员园援员园园圆辕蚤躁糟援圆苑猿员苑援[员员]月粤蕴粤月粤晕陨粤晕运,蕴粤郧粤晕耘月,陨晕云粤晕栽陨晕韵杂,藻贼葬造援栽澡藻糟澡藻鄄皂燥噪蚤灶藻杂阅云鄄员辕悦载悦蕴员圆遭蚤灶凿泽贼燥葬灶凿泽蚤早灶葬造泽贼澡则燥怎早澡贼澡藻燥则责澡葬灶则藻糟藻责贼燥则砸阅悦员蚤灶栽造赠皂责澡燥糟赠贼藻泽[允]援允月蚤燥造悦澡藻皂,圆园园缘,圆愿园(源圆):猿缘苑远园鄄猿缘苑远远援阅韵陨:员园援员园苑源辕躁遭糟援酝缘园愿圆猿源圆园园援[员圆]陨宰粤运陨砸陨杂,酝陨晕韵晕,栽粤运粤匀粤杂匀陨栽,藻贼葬造援匀蚤早澡藻则藻曾责则藻泽泽蚤燥灶燥枣糟澡藻皂燥噪蚤灶藻则藻糟藻责贼燥则悦载悦砸苑蚤泽造蚤灶噪藻凿贼燥藻葬则造赠葬灶凿皂藻贼葬泽贼葬贼蚤糟则藻鄄糟怎则则藻灶糟藻蚤灶责葬贼澡燥造燥早蚤糟葬造泽贼葬早藻Ⅰ灶燥灶泽皂葬造造糟藻造造造怎灶早糟葬灶糟藻则[允]援悦葬灶糟藻则,圆园园怨,员员缘(员员):圆缘愿园鄄圆缘怨猿援阅韵陨:员园援员园园圆辕糟灶糟则援圆源圆愿员援[员猿]宰粤晕郧允,杂匀陨韵在粤宰粤再,宰粤晕郧允,藻贼葬造援栽澡藻则燥造藻燥枣悦载悦砸苑辕砸阅悦员葬泽葬糟澡藻皂燥噪蚤灶藻则藻糟藻责贼燥则枣燥则悦载悦蕴员圆辕杂阅云鄄员蚤灶责则燥泽贼葬贼藻糟葬灶糟藻则[允]援允月蚤燥造悦澡藻皂,圆园园愿,圆愿猿(苑):源圆愿猿鄄源圆怨源援阅韵陨:员园援员园苑源辕躁遭糟援酝苑园苑源远缘圆园园援[员源]酝陨粤韵在,蕴哉运耘砸运耘,杂哉酝酝耘砸杂月悦,藻贼葬造援悦载悦砸苑(砸阅悦员)责则燥皂燥贼藻泽遭则藻葬泽贼葬灶凿造怎灶早贼怎皂燥则早则燥憎贼澡蚤灶增蚤增燥葬灶凿蚤泽藻曾责则藻泽泽藻凿燥灶贼怎皂燥则鄄葬泽泽燥糟蚤葬贼藻凿增葬泽糟怎造葬贼怎则藻[允]援孕则燥糟晕葬贼造粤糟葬凿杂糟蚤哉杂粤,圆园园苑,员园源(源园):员缘苑猿缘鄄员缘苑源园援阅韵陨:员园援员园苑猿辕责灶葬泽援园远员园源源源员园源援[员缘]尹东,严伟,张佐,等援抗悦载悦砸源单克隆抗体对口腔鳞癌细胞增殖与侵袭的影响[允]援宁夏医学杂志,圆园员远,猿愿(圆):员员苑鄄员员怨援[员远]再韵韵晕再,蕴陨粤晕郧在,在匀粤晕郧载,藻贼葬造援悦载悦糟澡藻皂燥噪蚤灶藻则藻糟藻责贼燥则鄄源葬灶贼葬早燥灶蚤泽贼遭造燥糟噪泽遭燥贼澡早则燥憎贼澡燥枣责则蚤皂葬则赠贼怎皂燥则葬灶凿皂藻贼葬泽贼葬泽蚤泽燥枣澡藻葬凿葬灶凿灶藻糟噪糟葬灶糟藻则蚤灶曾藻灶燥早则葬枣贼皂燥怎泽藻皂燥凿藻造泽[允]援悦葬灶糟藻则砸藻泽,圆园园苑,远苑(员缘):苑缘员愿鄄苑缘圆源援阅韵陨:员园援员员缘愿辕园园园愿鄄缘源苑圆援悦粤晕鄄园远鄄圆圆远猿援[员苑]悦匀韵运杂,再韵韵晕杂允,蕴耘耘允再,藻贼葬造援陨灶澡蚤遭蚤贼蚤燥灶燥枣贼怎皂燥则早则燥憎贼澡葬灶凿澡蚤泽贼燥责葬贼澡燥造燥早蚤糟葬造糟澡葬灶早藻泽枣燥造造燥憎蚤灶早贼则藻葬贼皂藻灶贼憎蚤贼澡葬糟澡藻皂燥噪蚤灶藻则藻糟藻责贼燥则悦载悦砸源葬灶贼葬早燥灶蚤泽贼蚤灶葬责则燥泽贼葬贼藻糟葬灶糟藻则曾藻灶燥早则葬枣贼皂燥凿藻造[允]援韵灶糟燥造蕴藻贼贼,圆园员猿,远(源):怨猿猿鄄怨猿愿援阅韵陨:员园援猿愿怨圆辕燥造援圆园员猿援员缘员缘援[员愿]王立文,沈晓洁,俞茹云,等援靶向沉默悦载悦砸源表达逆转肺癌细胞吉西他滨耐药性的作用研究[允]援中国生化药物杂志,圆园员缘(员圆):圆源鄄圆愿援[员怨]宰粤蕴耘晕栽韵宰陨悦在鄄杂粤阅蕴耘悦运粤酝,杂粤阅蕴耘悦运陨孕,月韵阅晕粤砸酝,藻贼葬造援杂贼则燥皂葬造凿藻则蚤增藻凿枣葬糟贼燥则鄄员(杂阅云鄄员)葬灶凿蚤贼泽则藻糟藻责贼燥则泽悦载悦砸源葬灶凿悦载悦砸苑蚤灶藻灶凿燥皂藻贼则蚤葬造糟葬灶糟藻则责葬贼蚤藻灶贼泽[允辕韵蕴]援孕蕴燥杂韵灶藻,圆园员源,怨(员):藻愿源远圆怨[圆园员远鄄园苑鄄园圆]援阅韵陨:员园援员猿苑员辕躁燥怎则灶葬造援责燥灶藻援园园愿源远圆怨援澡贼贼责:辕辕躁燥怎则灶葬造泽援责造燥泽援燥则早辕责造燥泽燥灶藻辕葬则贼蚤糟造藻蚤凿越员园援员猿苑员辕躁燥怎则灶葬造援责燥灶藻援园园愿源远圆怨援[收稿日期]摇圆园员远原员园原员源[修回日期]摇圆园员苑原园圆原圆愿[本文编辑]摇黄静怡·缘园猿·