cdna是什么SNP是什么意思？

逆转录后得到20ul的cDNA，为什么还要稀释十倍

1。

你可以做一个CDNA的琼脂糖凝胶电泳，跑的时候加上MAKER，然后对比在相同剂量下的亮度比，来推算CDNA的浓度。

模板的标准量如下，而且注意事项如下，我们一般加2ul template DNA (1 μg genomic DNA, 0.1-1 ng plasmid DNA) in 10 μl 模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有Taq酶抑制剂，③模板中蛋白质没有消 化除净，特别是染色体中的组蛋白，④在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。

⑤模 板核酸变性不彻底。

在酶和引物质量好时，不出现扩增带，极有可能是标本的消化处 理，模板核酸提取过程出了毛病，因而要配制有效而稳定的消化处理液，其程序亦应 固定不宜随意更改 2。

就是做PCR摸条件，我个人比较喜欢这种方法 （1）电泳结果出现非特异性条带，说明模板加的过量了，你可以根据非特异条带的亮度来判断浓度以决定减少多少的量 （2)电泳结果目的条代出现但是很弱,加大模板的量 （3）出现假阴性：增加模板的量

反转录和逆转录有什么区别?

反转录和逆转录的区别 “反转录”是指，在生物学中以RNA为模板，通过反转录酶，合成DNA的过程。

是DNA生物合成的一种特殊方式。

反转录是进行基因工程过程中，以RNA为模板提取出DNA遗传信息的过程。

反转录过程由反转录酶催化，该酶也称依赖RNA的DNA聚合酶（RDDP），即以RNA为模板催化DNA链的合成。

合成的DNA链称为与RNA互补DNA（cDNA）。

“逆转录”是指，在生物学中以RNA为模板合成DNA的过程，即RNA指导下的DNA合成。

此过程中，核酸合成与转录（DNA到RNA）过程与遗传信息的流动方向（RNA到DNA）相反，故称为逆转录。

逆转录过程是RNA病毒的复制形式之一，在逆转录的过程中需要逆转录酶的催化。

反转录与逆转录的区别在于，逆转录是RNA类病毒自主行为，在整合到宿主细胞内以RNA为模板形成DNA的过程。

二者共同点虽然都是为RNA→DNA的过程，但是发生的地点不同，以两者相对性的来说，反转录是在体外，逆转录是在体内。

获得目的基因有几种主要方法

获得目的基因常用的方法有PCR法、化学合成法、cDNA法及建立基因文库的方法来筛选 直接获取 1.从基因文库中获取 这个没什么就是现成的基因储存在受体菌上你用的时候提取出来就好了（基因组文库法 就是原教材中的用限制性内切酶直接获取。

利用λ噬菌体载体构建基因组文库的一般操作程序如下：① 选用特定限制性内切酶， DNA进行部分酶解，得到DNA限制性片段② 选用适当的限制性内切酶酶解λ噬菌体载体DNA。

③ 经适当处理，将基因组DNA限制性片段与λ噬菌体载体进行体外重组。

④ 利用体外包装系统将重组体包装成完整的颗粒。

⑤ 以重组噬菌体颗粒侵染大肠杆菌，形成大量噬菌斑，从而形成含有整个DNA的重组DNA群体，即文库。

）经典解释 2.cDNA文库法（即原教材中提到的逆转录法）。

cDNA文库，是指汇集以某生物成熟mRNA为模板逆转录而成的cDNA序列的重组DNA群体。

虽然可用基因组文库法来获取真核生物的目的基因，但是由于高等真核生物基因组DNA文库比其cDNA文库大得多，相关工作量同样大得多。

更为重要的是，在真核生物基因组中合有大量的间隔序列或内含子，但在大肠杆菌等原核生物中没有类似序列的存在，所以大肠杆菌不能从真核生物基因的初级转录本中去除间隔序列，即不能表达真核生物DNA。

而在真核生物成熟mRNA中已不存在间隔序列（已在拼接过程中被去除），所以可以以真核生物成熟mRNA为模板，逆转录而成的cDNA可被大肠杆菌表达。

因此，在基因工程中，cDNA文库法是从真核生物细胞中分离目的基因的常用方法。

3.直接分离基因最常用的方法是“鸟枪法”，又叫“散弹射击法”。

这种方法有如用猎枪发射的散弹打鸟，无论哪一颗弹粒击中目标，都能把鸟打下来。

鸟枪法的具体做法是：用限制酶（即限制性内切酶）将供体细胞中的DNA切成许多片段，将这些片段分别载入运载体，然后通过运载体分别转入不同的受体细胞，让供体细胞所提供的DNA（外源DNA）的所有片段分别在受体细胞中大量复制（在遗传学中叫做扩增），从中找出含有目的基因的细胞，再用一定的方法吧带有目的基因的DNA片段分离出来。

如许多抗虫，抗病毒的基因都可以用上述方法获得。

用“鸟枪法”获取目的基因的优点是操作简便，缺点是工作量大，具有一定的盲目性。

人工合成 1.(主要是序列已知的基因)。

主要是通过DNA自动合成仪，通过固相亚磷酸酰胺法合成，具体过程可以网上查询，反正是可以按照已知序列将核苷酸一个一个连接上去成为核苷酸序列，一般适于分子较小而不易获得的基因。

对于大的基因一般是先用化学合成法合成引物，再利用引物获得目的基因。

2.聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。

它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点；能在一个试管内将所要研究 的目的基因或某一DNA片段于数小时内扩增至十万乃至百万倍,使肉眼能直接观察和判断；可从一根毛发、一滴血、甚至一个细胞中扩增出足量的DNA供分析研 究和检测鉴定。

过去几天几星期才能做到的事情，用PCR几小时便可完成。

PCR技术是生物医学领域中的一项革命性创举和里程碑

基因测序可以用cDNA吗？基因测序和内含子有什么关系？

为具有与某RNA链呈互补的碱基序列的单链plementary DNA之缩写，或此DNA链与具有与之互补的碱基序列的DNA链所形成的DNA双链。

与RNA链互补的单链DNA，以其RNA为模板，在适当引物的存在下，由依赖RNA的DNA聚合酶（反转录酶）的作用而合成，并且在合成单链cDNA后，在用碱处理除去与其对应的RNA以后，以单链cDNA为模板，由依赖DNA的DNA聚合酶或依赖RNA的DNA聚合酶的作用合成双链cDNA。

真核生物的信使RNA或其他RNA的cDNA，在遗传工程方面广为应用。

在这种情况下，mRNA的cDNA，与原来基因的DNA（基因组DNA，genomic DNA）不同而无内含子；相反地对应于在原来基因中没有的而在mRNA存在的3′末端的多A序列等的核苷序列上，与exon序列、先导序列以及后续序列等一起反映出mRNA结构。

cDNA同样可以被克隆。

SNP是什么意思？

SNP即单核苷酸多态性，是由于单个核苷酸的改变而导致的核酸序列多态性。

一般来说，一个SNP位点只有两种等位基因，因此又叫双等位基因。

SNP在人基因组中的发生频率比较高，大约平均每1000个碱基中就有一个多态位点。