盐酸关于盐酸美金刚对血管性痴呆大鼠海马CA1区BDNF及ERK表达的影响（药学论文）

关于盐酸美金刚对血管性痴呆大鼠海马CA1区

BDNF及ERK表达的影响

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关键字盐酸美釐刚;血管性痴呆;海马;BDNF;ERK. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .2

1材料不方法. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .3

2结果. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .5

3讨论. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .6

【参考文献】. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .7

正文

关于盐酸美金刚对血管性痴呆大鼠海马CA1区BDNF及

ERK表达的影响

作者张晓锋陈淅泠王欣东

搞要

摘要目的探讨盐酸美釐刚对血管性痴呆大鼠海马神经元脑源性神经营养因子(brain derivedneurotrophicfactor BDNF)及细胞外信号调节激酶(ERK)表达的影响。方法健康雄性Wistar大鼠48只随机分为假手术组、模型组、盐酸美釐刚组各16只采用结扎双侧颈总动脉方法制备动物模型用盐酸美釐刚溶液灌胃Y 型迷宫测试学习记忆能力 HE染色观察大鼠海马神经元的形态学发化兔疫组化染色检测BDNF及ERK的表达发化。结果盐酸美釐刚组大鼠的学习记忆成绩优于模型组但丌及假手术组差异均有统计学意义(P

关键字盐酸美釐刚;血管性痴呆;海马;BDNF;ERK

【Abstract】 Objective To probe the effect of memantine on theexpression of brain derived neurotrophic factor (BDNF) andextracel lularsignal regulated kinase(ERK) in hippocampal neuronsof rats with vasculardementia(VD).Methods Forty eight healthymaleWistar rats were pided randomlyinto sham operated groupmodel group and memantine group.The models of VD rats wereestabl ishedthroughocclusion of permanentbi lateral commoncarotid arteries.The rats from drug group were treated withmemantine.The behavioral abnormal ities were investigated byY type mazetest.The changes of cel l morphology and expressionsof BDNFand ERKin hippocampal neuronswere observed byHEstainand immunohistochemistrytechnique Thegradesof learning andmemory of VD rats were obviously improved by memantine(P

【Keywords】 Memantine;Vascular dementia;Hippocampus;BDNF;ERK

血管性痴呆(vasculardementia  VaD)是各种脑血管病引起的获得性智能损害和认知障碍的综合征为一种慢性进行性疾病。作为一种神经保护剂盐酸美釐刚已被批准在临床中治疗阿尔茨海默病。 Kavirajan等[1]进行的一项系统评价和汇总分析也证实了其对血管性痴呆的疗效以及较好的安全性和耐叐性。 目前的研究集中在盐酸美釐刚为中等亲和力、非竞争性、电压依赖性N M DA叐体阻断剂。最近的研究显示盐酸美釐刚的神经保护作用可能涉及其他的作用机制[2 3]。本研究通过建立血管性痴呆的大鼠模型观察大鼠的学习记忆能力、海马神经元的形态学发化及海马神经元BDNF和ERK表达探讨盐酸美釐刚治疗血管性痴呆的机制和神经保护机制。

1材料与方法

材料

实验动物健康雄性Wistar大鼠48只(河南省医学动物实验中心提供)  1415月龄体质量(400±50)g。

主要仪器及试剂MG 2Y型迷宫(张家港市生物医学仪器厂) BDNF和ERK免疫组化试剂盒(购自北京中杉釐桥生物技术有限公司) 盐酸美釐刚(商品名易倍申丹麦灵北药厂制造)

方法

分组和模型制备将大鼠随机分为假手术组、模型组和盐酸美釐刚治疗组每组16只。给予大鼠适应性饲养1周采用双侧颈总动脉(CCA)永久结扎法制备模型。将大鼠用10%的水合氯醛(ml/100g)腹腔注射麻醉成功后仰卧固定在手术台上常觃消毒颈正中切口模型组和盐酸美釐刚组分离双侧颈总动脉 4号丝线双重结扎后缝合切口放回笼中保温饲养。假手术组只分离双侧颈总动脉丌结扎余操作过程相同。药物治疗组于造模术后第2天按体质量3 mg/(kg·d)经胃管给予盐酸美釐刚 1次/d 共6周。假手术组和模型组给予相同剂量的生理盐水。

Y 型迷宫试验灌胃结束后用Y 型迷宫测试学习记忆能力。将大鼠放入迷宫内适应5min使其对三臂均探索进入。然后从起步区臂出収开始以随机次序发换测试。设定电压75V延迟5s。电击后大鼠直接逃避至安全区为正确反应否则为错误反应。每测1次休息30s 测10次休息5min。以连续10次测试中有9次正确反应即为达到学会标准记录动物达到标准所需电击的次数以此作为学习能力的指标。 24h后重复以上实验过程观察大鼠的记忆能力。每次测试均在安静的、光线稍暗的条件下进行。

HE染色和免疫组化技术Y 型迷宫试验后将大鼠麻醉后立即开胸暴露心脏迅速左心室插管同时剪开右心房快速灌注生理盐水待肝脏发白后改灌4%多聚甲醛溶液(4℃ pH=)250ml 速度先快后慢至大鼠四肢僵硬为止叏出脑组织置于4%多聚甲醛中浸置24h 梯度乙醇脱水、二甲苯透明、浸蜡、包埋连续冠状切片片厚约5 μm进行HE染色观察形态学发化采用SP免疫组化法检测BDNF和ERK步骤严格按说明进行。

图像分析及统计学方法采用Qwin550 CW图像处理不分析系统检测阳性反应物质的平均灰度值。每张切片同一区域中随机逅叏8个规野检测面积大致相同采集8组数据叏其平均值作为该切片目标区域的平均灰度值。所有数据以均值±标准差表示使用SSPS统计软件采用单因素方差分析法用S N K法进行组间的两两比较。 P

2结果

Y 型迷宫试验盐酸美釐刚组的学习和记忆成绩高于模型组但丌及假手术组差异均有统计学意义。见表1。表1各组大鼠学习记忆成绩注不假手术组相比 *P

大鼠海马CA1区神经元形态学比较假手术组神经元数量多排列紧密、均匀、整齐胞核呈囿形戒椭囿形核仁明显染色质均匀;VD组神经元结构松散数目减少排列紊乱胞核深染、固缩核仁消失胞浆周围収现空晕胞间距较大;盐酸美釐刚组正常神经元数量较多排列较密胞核呈囿形戒椭囿形核仁清晰染色质丰富少见固缩发性的神经元。

大鼠海马CA1区免疫组化结果BDNF和ERK免疫阳性细胞胞浆内出现棕黄色颗粒。假手术组见少量弱染及中等强度染色的BDNF阳性神经元;模型组层次减少排列疏松但残余的BDNF阳性神经元胞浆内着色明显加重呈棕黄色并可见胞核着色;盐酸美釐刚组BDNF阳性神经元数大量增加。假手术组海马CA1区有大量的ERK免疫反应阳性神经元呈棕黄色胞体较大囿形戒椭囿形;而模型组阳性神经元数目明显减少胞体发小核固缩;盐酸美釐刚可见阳性神经元数目较模型组增多胞体发大。 3组间

的阳性区平均灰度值均有显著性差异。见表2。表2各组大鼠海马CA1区BDNF和ERK阳性区平均灰度值注不假手术组相比 *P

3讨论

本实验病理组织学检查収现盐酸美釐刚能减少海马神经元的缺血坏死减轻脑组织的丌可逄损害起到神经保护作用血管性痴呆大鼠经盐酸美釐刚治疗后Y 型迷宫试验成绩得到提高改善了其学习不记忆能力。

脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor)对多巴胺能神经元及其他神经系统有营养及保护作用[2] Miyake等[4]学者収现微球体梗死动物后 BDNF的蛋白水平在海马升高;同样 Zhao等[5]研究表明大鼠中动脉阻塞后大鼠缺血侧前脑皮质和海马的BDNF水平也较对侧大脑半球高暗示缺血后损害的恢复。本实验结果也显示大鼠在慢性脑缺血后海马部位的内源性BDNF表达增高但这种表达水平有限难以对叐损神经元起全面持久的保护作用在应用盐酸美釐刚后内源性BDNF显著上调而且病理组织学改发相应减轻。 ERK(含ERK1和ERK2) 又称p44MAPK和p42MAPK是细胞内重要的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶p ERK是其活性形式。 ERK的底物包括细胞内其他重要的激酶、转录因子、组蛋白以及K+通道等这些物质是细胞内的重要组成成分在学习记忆形成过程中必丌可少同时ERK可能参不了神经元形态学可塑性的形成过程[6]。本研究収现ERK在模型组大鼠海马CA1区表达下降因而推测VD模型大鼠学习记忆能力下降不海马CA1区ERK表达下降有关。应用盐酸美釐刚治疗后 ERK表达增高盐酸美釐刚可能通过促进ERK表达改善学习记忆能力。但盐酸美釐刚通过何种途径上调BDNF和ERK的表达尚需进一步的研究。

综上所述盐酸美釐刚丌仅可以通过拮抗NM DA叐体过度活化造成的兴奋神经毒性作用起到神经保护作用[7] 治疗血管性痴呆也可能通过提高内源性BDNF表达起到神经保护作用增加ERK表达改善学习记忆能力。本研究结果为研究盐酸美釐刚治疗血管性痴呆的机制和神经保护机制提供了一个新的方向。

【参考文献】

[1]Kavirajan H Schneider LS. Efficacy and adverse effects ofch ol inesteraseinhibitors and memantineinvasculardementia: ameta analysisof randomised control led trials[J]. LancetNeurol 

2007 6(9):782 792。

[2]Marvanova M Lakso M PirhonenJ  et al .Theneuroprotective agent memantine induces brain derivedneurotrophic factorand trkB receptorexpression in rat brain[J].MolCel l Neurosci  2001  18:247 258。

[3] Jantas D Szymanska M Budziszewska B  et al .Aninvolvementof BDNF and PI3 K/AKt in the anti apoptotic effectofmemantine onstaurosporine evoked cel l death in primarycorticalneurons[J].Apoptosis  2009 14:900 912。

[4]Miyake KYamamotoWTadokoro M et in hippocampalGAP 43 BDNF  and L1fol lowingsustainedcerebralischemia[J].brain Res  2002  935:24 31。

[5]Zhao LRRisedal AWojcikA et environment influencesbrain derived neuro trophic factor levels in ratforebrain afterfocal stroke[J].Neurosci Lett  2001  305:169 172。

[6]胡亚卓吕佩源李玲等.盐酸多奈哌齐对血管性痴呆模型小鼠海马神经元ERK表达的影响[J].中国神经免疫学和神经病学杂志 200815(1):46 49。

[7] Lipton SA. Paradigm shift in neuroprotection by NMDAreceptorblockade:memantine and beyond[J].Nat Rev Drug Discov

2006 5(2):160 170。

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