计数怎样查看隐藏文件

1用户指南CountessIIFL自动细胞计数仪荧光和明场应用货号:AMQAF1000出版号:MAN0010644版本:C.
0仅供研究使用.
不得用于诊断.
2本文所述信息如有更改,恕不另行通知.
免责声明在法律允许的范围内,LIFETECHNOLOGIES及/或其附属公司均不承担与本文有关或其引起的特殊、偶发、间接、惩罚性、多重或继发损害,包括产品的使用.
重要授权信息这些产品可能受到一项或多项限制使用标签许可的约束.
使用这些产品,即表示您接受所有相应的限制使用标签许可的条款和细则.
2015ThermoFisherScientificInc.
版权所有.
除特别说明外,所有商标均为ThermoFisherScientific及其附属公司的财产.
Cy是GEHealthcareUKLimited的注册商标.
ii1目录关于本指南31.
产品信息5产品内容5产品描述6仪器外部部件72.
开始准备8安装8加载资料10制备样本15计数板操作173.
细胞计数和细胞存活率分析19明场细胞计数19查看结果21识别计数目标22图片格式计数结果23设置计数结果门限244.
荧光分析25细胞荧光计数25查看结果28识别计数目标29图片格式计数结果30设置计数结果门限326.
保存结果33保存计数结果337.
仪器设置36概述36软件更新37日期/时间38更换光立方408.
维护42仪器护理42清洁CountessIIFL自动细胞计数仪43设置标称焦距442附录A:疑难解析.
46附录B:产品规格48技术规格48EVOS光立方49附录C:订购信息50CountessIIFL自动细胞计数仪及5050附录D:CSV文件格式51CSV文件格式,解释51附录E:安全性53本文中使用的安全性惯例53仪器上的符号54仪器上的安全性标签56仪器的一般安全性57化学品安全性58化学品废物安全性.
59电气安全性60生物危害安全性61安全性和电磁兼容性(EMC)标准62文件与支持63获取支持633关于本指南目标读者本用户指南适用于使用CountessIIFL自动细胞计数仪操作、维护并分析数据的实验室工作人员.
版本修订记录版本日期说明C.
02015年8月删除CountessII细胞计数仪信息、新SW版本更新步骤、更新法律和法规信息及品牌信息B.
02014年12月更正技术规格(细胞大小)A.
02014年9月新用户指南用户文件下列指南适用于CountessIIFL自动细胞计数仪.
指南出版号CountessIIFL自动细胞计数仪用户指南MAN0010644CountessII和CountessIIFL自动细胞计数仪快速参考卡(QRC)MAN0010826其他资源可通过Countess技术资源页面获取.
请登录www.
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com/countess获取实验方案、应用说明和教程.
文本和键盘规范本用户指南中使用的文本和键盘规范如下表所示.
本文中使用的安全性警示文字和符号,请参见第4页.
规范用途粗体粗体文字表示用户动作.
例如:按下更多.
右箭头符号()表示菜单选择,用于分开从下拉菜单或快捷菜单中依次执行或选择的命令.
例如:选择更多调整.
用户警示文字在本文中有两种用户警示文字.
每种警示文字表示需遵守要求或采取行动的特定级别,如下所述.
注:提供用户可能感兴趣或对其有帮助,但对产品使用不重要的信息.
切记!
提供正确操作仪器、准确安装或安全使用某化学品所必须的信息.
4安全性警示文字本文包括四种安全性警示文字,出现在需提醒用户注意相应危险的位置.
每种警示文字——切记、注意、警告、危险——表示需遵守要求或采取行动的特定级别,如下所述:切记!
——提供正确操作仪器、准确安装或安全使用某化学品所必须的信息.
注意!
——表示潜在的危险状况,如果不加以避免,则可能导致轻微或中度伤害.
它也用于警示避免不安全的操作.
警告!
——表示存在潜在的危险状况,如果不加以避免,则可能导致死亡或严重人身伤害.
危险!
——表示存在紧迫的危险状况,如果不加以避免,则可能导致死亡或严重人身伤害.
此类文字仅限用于极端危险的情况.
除"切记!
"警示外,本文中的每种安全性警示文字都伴有一个三角形危险警告,内含一个危险符号.
这些危险符号与仪器上附带的危险符号相同(参见附录E中的"安全性符号").
51.
产品信息产品内容CountessIIFL自动细胞计数仪附带的组件如下表所示.
组件规格CountessIIFL自动细胞计数仪(货号:AMQAF1000)各1台4接头电源线(适用于美国/加拿大/中国台湾/日本、欧洲或英国)各1根Countess细胞计数板(50块/盒)1盒CountessIIFL一次性计数板支架各1个CountessIIFL可重复使用的计数板支架各1个CountessIIFL光立方拆卸工具各1个CountessIIU盘各1个CountessIIFL自动细胞计数仪快速参考卡各1张收到仪器后应立即仔细检查仪器是否在运输过程中发生损坏.
确定仪器的所有部件(包括上表列出的)是否配备齐全.
必须与承运商签署损坏索赔条款;保证书不包括运输过程中造成的损坏.
文件安装说明请参见第8页.
仪器注册请登录www.
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com/registercountess注册仪器.
您需要提供序列号、用户名及您的详细联系方式.
仪器注册可确保您能及时获得软件更新信息和适用于CountessIIFL自动细胞计数仪的新分析产品.
6产品描述CountessIIFL自动细胞计数仪CountessIIFL自动细胞计数仪是一款全自动的3通道细胞计数仪和分析平台,它采用了EVOS光立方技术、先进的光学元件和图像分析算法,分析荧光标记的细胞或台盼蓝染色的悬浮样本.
CountessIIFL自动细胞计数仪提供了一个直观的用户界面,可以保存数据并生成报告,然后通过仪器附送或单独供应的U盘传输至PC.
计数细胞上样至一次性Countess细胞计数板和玻璃的CountessIIFL可重复使用的计数板上,放入仪器内(第15页).
每块计数板包含两个用以盛载样本的封闭式计数池,您可以同时检测两份不同的样本,或者对同一样本进行数据验证.
仪器只需10秒即可完成明场通道下一个样本的典型细胞计数,适用于各种真核细胞.
除细胞计数和存活率外,CountessIIFL自动细胞计数仪还可提供细胞大小信息.
除明场通道外,CountessIIFL自动细胞计数仪可容纳两个可更换的EVOS荧光光立方(第49页),适用于多种荧光研究应用.
CountessIIFL自动细胞计数仪配备有EVOS光立方,可进行悬浮细胞的荧光分析,包括同时计数两种不同的荧光染料染色的细胞、GFP和RFP表达、凋亡和细胞活性(活细胞、死细胞和总细胞).
这些分析适用于各种真核细胞.
7仪器外部部件①触摸屏显示:7英寸电容式触摸屏是CountessIIFL自动细胞计数仪的主用户界面.
它包含了执行所有功能所需的按钮,并显示细胞计数的数据.
②⑦USB接口:您可以通过USB接口将细胞计数数据和图像传输并保存至您的外部计算机中,以供保存和打印.
您可以使用仪器提供的U盘或其他任何标准、FAT32格式的U盘进行数据传输.
如果需要,您可以将USB鼠标插入后面的USB接口,进行仪器控制.
注:USB接口位于仪器的前面和后面,功能相同.
但是,第一个连接的U盘是首选的保存位置,无法同时读取两个U盘.
③计数板接口:细胞计数板接口用来将含有样本的分析计数板插入计数仪.
CountessIIFL仪器采用可更换的计数板特定的托架,能够容纳一次性Countess细胞计数板和玻璃的CountessIIFL可重复使用的计数板.
如需了解更多信息,请参见第17页中的"计数板操作".
④后盖板:通过CountessIIFL自动细胞计数仪的后盖板可以取用可选的EVOS光立方,并存放光立方工具和可重复使用的计数板托架.
后盖板通过-系留紧固件固定至仪器.
⑤电源开关:ON/OFF翘板开关是主电源开关.
仪器日常操作无需使用电源开关.
⑥EVOS光立方:EVOS光立方使CountessIIFL自动细胞计数仪能够分析荧光标记的样本.
CountessIIFL自动细胞计数仪可以容纳两个荧光光立方.
如需了解更多信息,请参见第19页的"EVOS光立方".
⑧电源输入插口:使用提供的电源线,并根据您所在国家的插座配置选用合适的插头,通过电源输入插口可将仪器连接至插座.
82.
开始准备安装操作环境将仪器置于平整表面上,避免受其他设备振动影响.
仪器背部保留至少5cm(2英寸)空间,以确保通风良好,防止电气组件过热.
避免仪器受到光源直射(如窗户).
周围室内光线会进入成像路径并影响图像质量.
工作温度范围:4°–32°C(40°–90°F).
相对湿度范围:30–90%.
切记!
切勿将仪器放在难以关闭仪器后面的主电源开关的位置(参见第7页).
万一仪器出现故障,关闭主电源开关,将仪器电源线从壁装电源插座中拔出.
安装仪器1.
打开仪器包装,将仪器置于平整、干燥的表面上.
2.
取下触摸屏上的塑料保护薄膜.
3.
将适用的电源线的一端插入仪器.
4.
将电源线插入插座.
请确保仅使用您仪器的配套电源线.
使用未经批准的电源线供电,可能会损害仪器.
9打开仪器1.
将仪器后面的电源开关翻至打开位置(第7页),打开仪器.
仪器初始化并显示主页界面.
2.
插入计数板,从主页界面,您可以立即进行分析(第19页).
或者您可以更改或添加资料(下文第3步)或更改仪器设置(下文第4步).
3.
要更改当前的资料或新增资料至仪器,按下左上角的资料(Profiles)按钮.
您可以创建自定义计数偏好(即根据细胞大小、亮度、圆度和/或相对荧光强度设置计数门限)(参见第10页).
4.
要更改仪器设置,按下右上角的仪器设置(InstrumentSettings)按钮.
通过仪器设置,您可以更新CountessII软件、更改日期和时间、安装或更换至多两个EVOS光立方(第36页).
10加载资料资料(Profile)界面资料界面可使您创建并保存至多9个自定义资料.
每个自定义资料定义了计数参数(大小、亮度、圆度和荧光强度)和自动化仪器功能(自动光线调整和自动FL阈值),可实现稳定且简单的工作流程.
您可以从主页、采集、结果、高级或调整界面访问资料界面.
当前资料显示在主页、采集、结果、高级或调整界面的左上角.
在编辑资料界面定义自动化仪器功能(如下)和计数参数(第11页)(参见第12页的"添加/编辑资料").
默认资料包含默认计数设置,其无法编辑.
选定资料中指定的计数参数将应用至所有新细胞计数中.
如果您已经进行计数,则从结果界面加载新资料会将计数偏好应用于当前的计数结果(总细胞、存活率等)和所有新计数中.
自动化仪器功能使用自动FL阈值(AutoFLThreshold)和自动光线调整(AutoLighting)复选框,在编辑资料界面中打开和关闭自动FL阈值和自动光线调整功能(参见第12页).
自动FL阈值:在荧光通道中自动应用阈值,减去背景荧光,以改进分析(不同样本的背景荧光水平可变).
该功能仅适用于配备有可选EVOS光立方的仪器.
自动光线调整:在明场中自动照明样本,提供了样本间的稳定性,减小了用户之间的差异性.
11计数参数使用参数滑块,在编辑资料界面中调整计数参数.
参数滑块对应于单个通道,使用滑块上方的通道选择(channelselection)单选按钮进行选择.
大小、亮度和圆度滑块荧光强度滑块大小:向上移动滑块,算法将较大的目标计数在内.
向下移动滑块,只计数较小的目标.
=较大的目标=较小的目标亮度:向上移动滑块,算法将亮度较高的目标计数在内.
向下移动滑块,只计数最模糊的目标.
=亮度较高的目标=较模糊的目标圆度:向上移动滑块,算法将除圆形外更多形状的目标计数在内.
向下移动滑块,只计数圆形目标.
=圆度较低=圆度较高荧光强度:向上移动滑块,算法将荧光亮度较高的目标计数在内.
向下移动滑块,只计数最模糊的目标.
=荧光亮度较高的目标=模糊或荧光较弱的目标大小、亮度和荧光强度滑块是范围滑块.
要调整上下限且不更改数据范围,拖动滑块的中间部分(即滑动条).
要只调整上限或下限,朝目标方向移动上或下滑动柄.
这同时也会更改细胞计数数值范围.
圆度滑块仅设置单一阈值;位于设置值范围内的细胞被计数,超出该范围的细胞被排除.
要调整圆度阈值,朝目标方向拖动滑块.
12加载资料(Profile)1.
按下屏幕左上角的资料(Profiles)按钮,打开资料界面.
2.
按下目标资料进行选择,然后按下加载(Load).
仪器将加载选定资料中指定的计数参数,并返回上一界面.
3.
要返回上一界面且不加载新资料,按下前一个(previous)按钮.
仪器将保留保存的资料,并返回上一界面但不加载该资料.
添加/编辑资料1.
按下屏幕左上角的资料(Profiles)按钮,导航至资料界面.
2.
要添加或编辑新资料,选择一个空的或已有的资料,然后按下编辑(Edit).
打开选定资料的编辑界面.
注:默认资料包含默认计数设置,其无法编辑.
3.
选择或取消选择自动FL阈值(AutoFLThreshold)复选框,打开或关闭自动FL阈值功能(第10页).
注:该功能仅适用于配备有可选EVOS光立方的仪器.
4.
选择或取消选择自动光线调整(AutoLighting)复选框,打开或关闭自动光线调整功能(第10页).
定义明场通道的计数参数:5.
要定义明场通道中的新计数参数:a.
从台盼蓝(TrypanBlue)选择框,选择活细胞(Live)或死细胞(Dead)单选按钮(参见下图).
b.
使用适当的参数滑块调整大小、亮度和圆度阈值(参见第11页).
13定义荧光通道的计数参数6.
要定义荧光分析的新计数参数(仅适用于配备有可选EVOS光立方的仪器):a.
从FL选择框,使用适当的单选按钮选择目标通道(参见下图).
可选选项有BF(明场)和至多两个荧光通道,具体取决于安装的光立方(下面的示例中的GFP和TxRed).
b.
使用适当的参数滑块定义所选通道的新计数参数(参见第11页).
c.
剩下的通道重复上述操作(如需要).
注:利用BF通道中的参数滑块,您可以根据大小、亮度和圆度设置计数结果门限.
利用选定荧光通道的参数滑块,您可以根据该通道的相对荧光强度设置计数结果门限.
147.
要指定新资料的名称或更改现有资料的名称,按下资料名称(Profilename)文本框.
打开字母数字键盘.
8.
使用字母数字键盘键入目标资料.
要输入符号,按下符号(@%&)键.
要返回字母数字键盘,按下ABC.
9.
按下确定(Enter),保存名称并返回编辑资料界面.
要返回编辑资料界面且不保存名称,按下关闭(close)按钮.
10.
按下保存(Save)保存新资料,然后在确认界面中按下关闭(Close),返回资料界面.
要返回资料界面但不保存,按下取消(Cancel).
11.
在资料界面中,按下加载(Load).
仪器将加载选定资料中指定的计数参数,并返回上一界面.
12.
要返回上一界面且不加载新资料,按下前一个(previous)按钮.
仪器将保留保存的资料,并返回上一界面但不加载该资料.
15制备样本建议为获得最佳结果,请遵循下列建议:确保细胞样本充分混匀.
检测范围为1x104–1x107个细胞/mL,最佳范围为1x105–4x106个细胞/mL.
为了获得准确的细胞存活率分析结果,请确保计数区域覆盖有细胞悬浮液,并在遵照分析实验方案染色后立即计数细胞.
切勿按压计数板的光学表面.
手持计数板的边缘.
小心不要在样本中形成气泡.
Countess计数板上样1.
将10μL细胞悬液加至10μL0.
4%的台盼蓝染料中,制备样本.
上下吹打几次混匀样本混合物.
2.
轻轻吸取10μL样本至上半月形的上样区域.
样本通过毛细管操作上样至计数板.
3.
使样本混合物在计数板中静置30秒,然后将计数板插入计数板接口(参见第7页).
如果细胞计数板插入正确,您将听到轻轻的咔嗒一声.
4.
要取下计数板,将计数板轻轻推进仪器,直到听到咔嗒声,在弹簧压力下推出计数板.
抓住计数板,取出.
注:Countess细胞计数板使用后,请将其视为有害生物废物妥善处理.
请勿重复使用一次性计数板.
16CountessIIFL可重复使用的计数板上样1.
将样本上样至CountessIIFL可重复的计数板之前,先在计数池上放一块盖玻片,确保盖玻片干净且无油脂.
2.
轻轻吸取10μL样本至进样口,通过毛细管操作将样本移至计数池.
正确上样的计数池应在盖玻片下方形成一层均匀的液体薄膜.
3.
使用CountessIIFL可重复的计数板之后,用水冲洗计数板和盖玻片,然后用70%乙醇清洁.
使用Kimwipes实验室组织,清洁并干燥计数板(如需要).
注:Countess细胞计数板或CountessIIFL可重复的计数板的每个计数池的样本容量为10-μL.
请勿溢出计数池.
17计数板操作CountessIIFL仪器采用可更换的计数板特定的托架,能够容纳一次性Countess细胞计数板和玻璃的CountessIIFL可重复使用的计数板.
Countess细胞计数板1.
要使用塑料一次性Countess细胞计数板及CountessIIFL自动细胞计数仪,将计数板托架(黑色,参见下图)插入仪器的计数板接口,直到听到咔嗒声.
注:CountessIIFL自动细胞计数仪附带一次性计数板托架(已安装)2.
按第15页所述,将样本上样至计数板,然后将计数板插入计数板接口内的托架,直到听到咔嗒声.
3.
要取下计数板,将计数板轻轻推进仪器,直到听到咔嗒声,在弹簧压力下推出计数板.
抓住计数板,取出.
4.
可选:要取下计数板托架,轻轻挤压调整片,将托架完全拉出仪器.
注:您可以将计数板托架保存在仪器背部的盖板后面(参见第7页).
18CountessIIFL可重复使用的计数板1.
要使用CountessIIFL可重复使用的计数板,打开CountessIIFL自动计数仪的后盖板,后盖板通过两个-系留紧固件固定至仪器.
2.
从后盖板里面取出可重复使用的计数板托架(白色).
3.
按第16页所述上样至可重复使用的玻璃计数板,将上样好的计数板放在白色托架内.
4.
将托架和可重复使用的计数板组件插入计数板接口内,轻轻推进仪器,直到听到咔嗒声.
5.
要取下计数板,将计数板轻轻推进仪器,直到听到咔嗒声,在弹簧压力下推出计数板.
抓住计数板,取出.
6.
可选:要计数可重复使用的计数板上的第二种样本,只需从托架上取下计数板,旋转,重新插入托架内,这样第二个样本即可对齐样本查看孔.
注:您可以将计数板托架保存在仪器背部的盖板后面(参见第7页).
193.
细胞计数和细胞存活率分析明场细胞计数计数步骤1.
将10μL细胞悬液加至10μL0.
4%的台盼蓝染料中,制备样本.
上下吹打几次混匀样本混合物.
2.
按第15页所述,将10μL样本混合物(每个计数池)上样至计数板.
使样本混合物静置30秒.
3.
可选:按第12页所述,按下资料(Profiles)按钮并加载目标资料.
4.
将计数板插入计数板接口(参见第7页),确保样本一侧完全插入到仪器中.
如果细胞计数板插入正确,您将听到轻轻的咔嗒一声.
5.
插好计数板后,仪器自动照明样本,设置明场照明强度,自动聚焦细胞.
注:要关闭自动光线调整功能,请参见第13页.
6.
可选:要手动调整焦距,按下焦距(Focus)按钮,然后使用焦距滑块,聚焦样本(参见第44页).
7.
按下设置(Set)按钮,设置焦距,折叠焦距控件.
焦距设置好后,焦距滑块上的设置按钮变为不可用状态,确认焦距设置已保存.
注:如果需要,缩放(Zoom)图像调整焦距或光线.
208.
可选:使用光源滑块设置曝光.
光源滑块控制LED强度、照相机增益和曝光时间,可用于调整图像亮度.
注:如果您的仪器配备有EVOS光立方,首先按下调整(Adjust),然后选择明场(白色圆圈)作为光源.
设置曝光,然后按下完成(Done)返回采集界面.
9.
按下采集(Capture).
注:如果您的仪器配备有EVOS光立方,确保在采集通道下只选定了BF(明场)复选框,然后再采集图像.
仪器暂时采集图像并显示结果(总浓度、活细胞和死细胞的百分比和浓度).
如需了解更多信息,请参见第21页的"查看结果".
后续步骤要识别计数为"活细胞"或"死细胞"的目标(即细胞),按下更多(More)导航至高级界面(第22页).
要查看活细胞和死细胞的分布(图片格式),按下图片(Graph)按钮(参见第23页).
要根据目标大小、亮度或圆度设置结果门限,首先按下更多(More)打开高级界面,然后按下调整(Adjust)导航至调整界面(第24页).
要永久性保存结果,按下保存(Save)(参见第33页).
要进行新计数,取下计数板,将第二个计数池朝前重新插入仪器,或插入新的计数板.
21查看结果明场结果界面使用明场通道进行细胞计数和细胞存活率分析的结果界面显示了计数目标的合成图像以及细胞计数和细胞存活率计算的结果(总浓度、活细胞和死细胞的百分比和浓度).
注:在明场下进行细胞计数和细胞存活率分析时,计数算法假定您将细胞与台盼蓝以1:1的比例稀释,并在计算总细胞浓度时将其计算之内.
结果界面中显示的细胞浓度是加入台盼蓝稀释前的初始细胞浓度.
22识别计数目标高级界面通过高级界面可以识别各通道计数的目标(即细胞),将其包括在计数结果内供以后查看.
查看标记目标后,您可以根据应用调整大小、亮度和/或圆度阈值.
识别在细胞计数和细胞存活率分析中计数的细胞1.
在结果界面中,单击更多(More).
打开高级界面.
2.
要识别被计数为"活细胞"的细胞,按下活细胞(Live)按钮.
"活细胞"将在屏幕上以绿色圆圈圈出.
要识别被计数为"死细胞"的细胞,按下死细胞(Dead)按钮.
"死细胞"将在屏幕上以红色圆圈圈出.
注:您可以选择一个或两个选项.
在下面的示例中,活细胞(Live)和死细胞(Dead)按钮均被按下,"活细胞"和"死细胞"分别标记为绿色和红色圆圈.
3.
要在屏幕上取消"活细胞"(绿色)或"死细胞"(红色)标记,分别再次按下活细胞(Live)或死细胞(Dead)按钮.
23图片格式计数结果查看图片对于在明场通道中进行的细胞计数和细胞存活率分析,您可以根据大小,以图片格式查看细胞分布(活细胞和/或死细胞).
注:您可以在结果、高级和调整界面中查看图片.
1.
要查看根据细胞大小显示活细胞和/或死细胞分布的图片,按下图片(Graph)按钮.
2.
要只查看活细胞或死细胞的分布,勾选图片上对应的活细胞(Live)或死细胞(Dead)复选框.
图片将根据大小自动更新并显示细胞分布(仅选定细胞群体).
3.
可选:使用大小、亮度和圆度滑块,调整计数参数.
调整计数参数后,计数结果和图片将自动更新.
4.
要关闭图片,再次按下图片(Graph)按钮.
24设置计数结果门限调整界面明场通道中的细胞计数和细胞存活率分析调整界面包含了根据大小、亮度和圆度设置计数结果门限的控件.
您可以在进行计数前或计数后调整计数参数.
设置计数结果门限1.
在结果界面中,按下更多(More)打开高级界面.
2.
可选:按下活细胞(Live)和/或死细胞(Dead)按钮,识别选定细胞群体中的细胞(参见第22页).
3.
在高级界面中,按下调整(Adjust)打开调整界面.
4.
可选:按下图片(Graph)按钮,根据大小查看细胞分布(活细胞和/或死细胞)(参见第24页).
5.
选择您想要设置门限的通道(活细胞或死细胞).
6.
使用大小、亮度和圆度滑块,调整计数参数.
注:有关计数参数和计数参数控件(即参数滑块)的介绍,请参见第11页.
7.
完成后,按下完成(Done)保存计数参数更改,并返回高级界面.
按下取消(Cancel)返回结果界面,但不保存更改.
8.
在高级界面中,按下计数(Count),使用新计数参数重新计数您的结果.
9.
要永久性保存您的结果,参见第33页.
254.
荧光分析细胞荧光计数概述CountessIIFL自动细胞计数仪配备有可选EVOS光立方,适用于各种荧光应用,包括同时计数两种不同的荧光染料染色的细胞、GFP和RFP表达、凋亡和细胞存活率分析.
如需了解CountessIIFL细胞计数仪上EVOS光立方的安装说明,参见第40页.
计数步骤1.
确保您的荧光细胞样本充分混匀.
2.
按第15页所述,将10μL荧光样本混合物(每个计数池)上样至计数板.
使样本混合物静置30秒.
3.
可选:按下屏幕左上角的资料(Profiles)按钮,打开资料界面,按第10页所述加载目标资料.
4.
将计数板插入计数板接口(参见第7页),确保样本侧完全插入到仪器中.
如果细胞计数板插入正确,您将听到轻轻的咔嗒一声.
5.
插好计数板后,仪器自动照明样本,设置明场照明强度,自动聚焦细胞.
注:要关闭自动光线调整功能,请参见第13页.
266.
可选:要手动调整焦距,按下焦距(Focus)按钮,然后使用焦距滑块,聚焦样本(参见第44页).
7.
按下设置(Set)按钮,设置焦距,折叠焦距控件.
焦距设置好后,焦距滑块上的设置按钮变为不可用状态,确认焦距设置已保存.
8.
要在不同光源下查看样本,按下您想要的光源(Lightsource)按钮.
仪器将在选定通道中显示样本(明场或荧光).
在下面的示例中,样本在GFP通道中显示.
注:光源按钮选择光源通道(明场和/或荧光)用于样本照明,并可在设置选定通道曝光时使用(参见第9–11步);它们无法确定用于采集图像的通道.
9.
要设置曝光,按下调整(Adjust)导航至调整界面.
2710.
按下您想要使用的通道的光源(lightsource)按钮设置曝光,使用光源滑块调整曝光值.
剩下的通道重复上述操作(如果需要).
11.
设置曝光后,按下完成(Done)返回采集界面.
要返回资料(Profile)界面但不更改曝光,按下取消(Cancel).
12.
在采集界面中,选择您想要采集的通道的采集通道(Collectchannels)复选框.
13.
按下采集(Capture).
仪器暂时采集图像并显示结果(总浓度、各荧光通道中计数的细胞的百分比和浓度).
如需了解更多信息,请参见第28页的"查看结果".
后续步骤要识别各通道中计数的目标(即细胞),按下更多(More)导航至高级界面(第29页).
要查看各通道计数细胞的分布(图片格式),按下图片(Graph)按钮(参见第30页).
要根据目标大小、亮度、圆度或相对荧光强度设置结果门限,首先按下更多(More)打开高级界面,然后按下调整(Adjust)导航至调整界面(第32页).
要永久性保存结果,按下保存(Save)(参见第33页).
要进行新计数,取下计数板,将第二个计数池朝前插入仪器,或插入新的计数板.
28查看结果细胞荧光分析的结果界面细胞荧光分析的结果界面显示了计数目标的合成图像以及细胞计数和细胞存活率计算的结果(总浓度、各荧光通道中计数的细胞的百分比和浓度).
注:荧光计数后显示的总细胞浓度未将稀释度计算在内.
因此,结果反映了计数板中的实际细胞浓度,必须乘以稀释系数,才能计算出样本的初始细胞浓度.
这与明场细胞计数相反,明场计数算法假定样本与台盼蓝以1:1的比例稀释,结果界面显示初始细胞浓度(即稀释前).
29识别计数目标高级界面通过高级界面可以识别各通道计数的目标(即细胞),将其包括在计数结果内供以后查看.
查看标记目标后,您可以根据应用调整大小、亮度和/或圆度阈值.
识别荧光分析中计数的细胞1.
在结果界面中,按下更多(More)打开高级界面.
2.
可选:要在特定的光源下(明场和/或荧光)查看样本,选择目标通道(Channels)复选框(例如上面示例中的明场).
您可以在任意通道或所有可用通道中显示样本.
3.
要识别在特定通道中计数的细胞,按下相应的边界(boundaries)按钮.
选定通道中计数的细胞将在屏幕中圈出(颜色与选定通道相同).
在下面的示例中,GFP和TxRed边界(TxRedboundaries)按钮已按下,GFP和TxRed通道中计数的细胞分别以绿色和红色圆圈标记.
4.
要取消特定通道中计数的细胞的标记,再次按下相应的边界(boundaries)按钮.
30图片格式计数结果查看细胞荧光分析的图片对于荧光分析,您可以根据大小或相对荧光强度,以图片的格式查看细胞分布.
注:您可以在结果、高级和调整界面中查看图片.
1.
要查看根据细胞大小显示细胞分布的图片,按下图片(Graph)按钮,然后选择BF(明场).
图片显示总细胞计数的大小分布(细胞数量与细胞大小,μm)以及各荧光通道中计数细胞的平均大小.
2.
要根据相对荧光强度查看细胞分布,按下图片(Graph)按钮,然后选择FL(荧光).
图片根据荧光强度显示细胞分布.
313.
要从图片中删除特定通道中计数的细胞,在图片中取消勾选相应的通道(channel)复选框.
图片自动更新并仅在选定(即勾选)通道中根据相对荧光强度显示细胞分布.
4.
要在图片中增加特定通道中计数的细胞,重新勾选相应的通道(channel)复选框.
5.
要关闭图片,再次按下图片(Graph)按钮.
32设置计数结果门限调整界面细胞荧光分析的调整界面包含了根据大小、亮度、圆度和荧光强度设置计数结果门限的控件.
您可以在计数后调整计数参数.
设置计数结果门限1.
在结果界面中,按下更多(More)打开高级界面.
2.
可选:要在特定的光源下(明场和/或荧光)查看样本,在高级界面中选择目标通道(Channels)复选框(参见第29页).
3.
可选:在高级界面中按下目标边界(boundaries)按钮,识别对应通道中计数的细胞(参见第29页).
4.
按下调整(Adjust)打开调整计数参数界面,其中包含了调整所选通道的计数参数的控件.
注:有关计数参数和计数参数控件(即参数滑块)的介绍,请参见第11页.
5.
可选:按下图片(Graph)按钮,根据大小或荧光强度查看细胞分布(参见第30页).
6.
选择明场通道(白色圆圈),使用大小、亮度和圆度滑块调整大小、亮度和圆度阈值.
7.
选择理想的荧光通道(彩色圆圈),使用荧光强度滑块调整荧光强度阈值.
注:可用的荧光通道取决于仪器安装的EVOS光立方.
8.
完成后,按下完成(Done)保存计数参数更改,并返回高级界面.
按下取消(Cancel)返回结果界面,但不保存更改.
9.
在高级界面中,按下计数(Count),使用新计数参数重新计数您的结果.
336.
保存结果保存计数结果保存界面CountessIIFL自动细胞计数仪允许您使用U盘保存数据和图像.
要保存实验,您可以从下列方案中选择任意组合:结果:以选定的图像格式(JPEG、BMP、PNG或TIFF)保存仪器上显示的结果界面,包含或不包含图像.
图像:仅以选定的图像格式(JPEG、BMP、PNG或TIFF)保存原始采集图像.
数据:将实验数据保存为CSV文件(逗号分隔型取值).
任意第三方软件或电子制表程序均可处理或重新显示CSV格式的结果.
如需了解有关CSV文件格式的更多信息,请参见"附录D:CSV文件格式",第51页.
注:如果您想要保存图片结果(其中显示基于细胞大小或荧光强度的细胞分布),应确保图片在结果界面中显示.
保存步骤1.
要保存数据,将CountessIIU盘(或类似产品)插入仪器可用的USB接口(参见第7页).
注:USB接口位于仪器的前面和后面,功能相同.
但是,第一个连接的U盘是首选的保存位置.
2.
在结果界面中,按下保存(Save)导航至保存界面.
343.
要指定实验名称,按下文件名称(Filename)文本框.
打开字母数字键盘.
4.
使用字母数字键盘输入文件名称.
要输入符号,按下符号(@%&)键.
要返回字母数字键盘,按下ABC.
5.
按下确定(Enter),保存名称并返回保存界面.
要返回保存界面且不保存名称,按下关闭(close)按钮.
6.
选择目标模式保存您的实验结果、图像、数据(Result,Images,Data).
您可以选择单一模式(如仅结果)或任意模式组合(如结果、图像和数据).
在下面的示例中,选择图像(Images)和数据(Data).
357.
默认情况下,结果和图像保存为JPEG文件.
要选择不同的文件格式,按下文件类型(filetype)按钮.
打开选择文件类型界面.
注:数据只能保存为CSV文件.
8.
按下选择目标文件类型.
可用的选项包括JPEG、BMP、PNG和TIFF.
选好后,仪器返回保存界面.
要返回保存界面且不更改文件类型,按下关闭(close)按钮.
9.
按下保存(Save),将您的实验以选定模式保存至U盘.
10.
按下关闭(Close),然后将U盘转移至目标位置.
367.
仪器设置概述仪器设置界面要访问仪器设置界面,按下主页上的仪器设置(InstrumentSettings)按钮(第9页).
在仪器设置界面中,您可以:进行软件更新(第37页)设置日期和时间(第38页)更换或安装EVOS光立方(第40页)37软件更新软件更新指南用于传输软件更新文件的U盘必须为FAT32格式;请确认后再继续.
如果需要,遵照针对您的操作系统推荐的步骤重新格式化U盘为FAT32格式.
注:重新格式化U盘将导致全部文件丢失.
备份U盘中的文件,然后重新格式化.
软件更新文件必须保存在U盘的最上一层,不可放在文件夹或子文件夹内.
软件更新文件在传输过程中必须是未被损坏的.
切勿重命名或压缩软件更新文件.
更新CountessII/IIFL软件1.
请登录www.
thermofisher.
com/countessupdate,下载最新的CountessII/IIFL软件版本至您的桌面上.
注:软件更新文件采用版本特定的名称,以扩展名.
lft结尾(如软件版本1.
0.
202的名称为Countess_II_v_1_0_202.
lft).
2.
将软件更新文件拷贝至U盘,确保其保存在最上一层,且未隐藏在文件夹内.
3.
将U盘插入仪器的其中一个USB接口(参见第7页).
4.
在主页上按下仪器设置(InstrumentSettings)按钮(第9页),打开仪器设置界面(第36页).
5.
从仪器设置菜单中选择软件更新(SoftwareUpdate).
仪器扫描U盘,查找最新的软件版本.
6.
按照提示,选择立即更新(UpdateNow).
7.
更新结束后,重启仪器.
38日期/时间设置日期和时间1.
在主页上按下仪器设置(InstrumentSettings)按钮(第13页),打开仪器设置界面.
2.
按下仪器设置菜单中的日期/时间(Date/Time),打开日期/时间界面.
3.
选择您想要使用的日期格式(Dateformat).
4.
按下任意日期(Date)文本框(MM、DD或YYYY),打开编辑日期键盘.
5.
使用键盘,将日期输入月(Month)、日(Day)和年(Year)文本框,每次输入后按下确定(Enter).
6.
输入日期后,按下关闭(close)按钮返回日期/时间界面.
397.
选择您想要使用的时间格式.
可用的选项有12小时和24小时格式.
8.
按下任意时间(Time)文本框(小时或分钟),打开编辑时间键盘.
9.
使用键盘,将时间输入小时(Hours)和分钟(Minutes)文本框,每次输入后按下确定(Enter).
10.
输入时间后,按下关闭(close)按钮返回日期/时间界面.
11.
如果您已选择12小时格式,则选择AM或PM.
12.
按下保存(Save),设置时间和日期,返回仪器设置界面.
按下取消(Cancel)返回仪器设置界面,但不保存更改.
40更换光立方安装或更换EVOS光立方CountessIIFL自动细胞计数仪可以容纳两个EVOS光立方.
每个用户可更换的自动配置的EVOS光立方均包含一个LED、平行光管和荧光滤光片.
EVOS光立方不是仪器标配,必须单独购买(参见第49页).
要安装或更换光立方:1.
在主页上按下仪器设置(InstrumentSettings)按钮(第9页),打开仪器设置界面.
2.
按下更换光立方(ChangeLightCube).
仪器定位光立方托盘,启动光立方安装.
3.
按照提示,使用仪器后面的电源开关关闭CountessIIFL自动细胞计数仪的电源(第7页).
4.
拔下CountessIIFL自动细胞计数仪的电源线.
5.
打开后盖板,后盖板通过两个-系留紧固件(用红色箭头表示)固定至CountessIIFL自动计数仪,取下后盖板.
6.
将光立方放入仪器后面的一个空槽中.
417.
使用后盖板内提供的工具(图A,下),拧紧光立方一端的两个螺钉,固定光立方(图B中的红色箭头,下).
8.
要取下光立方,松开固定至仪器的两个螺钉.
9.
将光立方拆卸工具插入中央孔内(图B中的白色箭头,上),然后轻轻拉出光立方.
注:始终将光立方拆卸工具保存在后盖板中,以方便取用.
10.
安装后盖板,拧紧两个-系留紧固件固定.
11.
插上CountessIIFL自动细胞计数仪的电源线.
12.
将仪器后面的电源开关至打开位置,关闭CountessIIFL自动细胞计数仪.
428.
维护仪器护理护理的一般指导原则遵照第43页所述的清洁步骤,使用适当的清洁溶液清洁各部件.
如果液体溅到仪器上,立即关闭电源并擦干.
电源必须使用正确的电源.
序列号标签(仪器底部)上和本用户指南"技术规格"章节提供了电源适配器规格(第48页).
因电源适配器不兼容导致的损伤不在质量保证范围内.
注意!
切勿自行拆卸或维修仪器.
切勿拆卸任何需要使用工具方可拆卸的外壳或部件,获取移动部件.
操作人员必须经过培训方可执行危险操作.
未经授权的修理可能会损害仪器或改变其功能,导致质量保证无效.
请联系您当地的经销商安排服务.
切记!
如果您对于去污剂或清洁剂与设备部件或材料的兼容性方面存有任何疑问,请联系技术支持(第63页)或您当地的经销商了解相关信息.
43清洁CountessIIFL自动细胞计数仪简介我们建议定期清洁CountessIIFL自动细胞计数仪,防止灰尘积聚,影响其性能并造成污染.
注意!
要避免电击,应始终关闭CountessIIFL自动细胞计数仪,拔下电源线后再清洁或去除仪器污染.
注意!
所有与其接触的生物学样本和材料均可能传播传染病,应被视为生物危害性样本.
应遵守所有适用的当地、本省/州和/或本国相关法规.
穿戴合适的保护眼镜、防护服和手套.
切记!
采用非sp制造商推荐的清洁或去污染方法可能会损坏仪器.
清洁触摸屏使用浸有LCD清洁溶液的柔软无绒布擦拭CountessIIFL自动细胞计数仪的触摸屏.
在清洁过程中切勿过度用力.
清洁后应立即擦干触摸屏.
确保清洁溶液未进入电源按钮、电源插座、计数板接口或USB接口.
切勿将任何液体直接倾倒或喷洒在仪器上,以免插入仪器电源时发生电击.
切勿使用腐蚀性清洁溶液或材料,以免触摸屏出现划痕.
清洁仪器外壳使用浸有蒸馏水的柔软无绒布擦拭CountessIIFL自动细胞计数仪的仪器外壳.
清洁后应立即擦干仪器.
确保水或其他清洁溶液未进入电源按钮、电源插座、计数板接口或USB接口.
切勿将任何液体直接倾倒或喷洒在仪器上,以免插入仪器电源时发生电击.
去除仪器污染使用浸有70%乙醇的柔软无绒布擦拭CountessIIFL自动细胞计数仪的仪器外壳.
清洁后应立即擦干仪器.
避免使用漂白溶液,因其可能导致漂白液晶体残留在仪器上.
确保水或其他清洁溶液未进入电源按钮、电源插座、计数板接口或USB接口.
切勿将任何液体直接倾倒或喷洒在仪器上,以免插入仪器电源时发生电击.
44设置标称焦距概述标称焦距是自动聚焦功能在Z点(即深度)周围搜索,提供样本焦距微调.
CountessIIFL自动细胞计数仪的自动聚焦算法旨在突出明场通道中活细胞和死细胞的差异.
最佳焦距是活细胞中心明亮,死细胞整个细胞区域呈暗色(参见下面的示例).
焦距不佳焦距最佳要启动最佳自动聚焦功能,您可能需要通过手动调整初步微调明场焦距,然后设置标称焦距.
自动聚焦功能可以设置一个用于后续样本的细胞焦距.
设置标称焦距1.
将10μL细胞悬液加至10μL0.
4%的台盼蓝染料中,制备样本.
上下吹打几次混匀样本混合物.
2.
将10μL样本混合物上样至Countess细胞计数板(第15页)或CountessIIFL可重复使用的计数板(第18页)上.
使样本混合物静置30秒,确保焦平面均匀.
3.
将计数板插入仪器计数板接口(参见第7页),确保样本侧完全插入到仪器中.
4.
插好计数板后,仪器自动照明样本,设置明场光源强度,自动聚焦细胞.
455.
要手动调整焦距,按下焦距(Focus)按钮.
6.
使用焦距滑块或加(plus)和减(minus)按钮,微调明场焦距.
注:如果需要,缩放图像调整焦距或光线.
7.
找到最佳焦距后,按下设置(Set)设置标称焦距.
焦距设置好后,焦距滑块上的设置按钮变为不可用状态,确认焦距设置已保存.
46附录A:疑难解析注:CountessIIFL软件定期更新.
如果您对实验有任何疑问,请先登录网站检查是否有新软件版本可用.
您可以从www.
thermofisher.
com/countessupdate下载最新的软件版本.
您还可以登录www.
thermofisher.
com/registercountess注册您的CountessIIFL仪器,获得有关未来软件更新的信息.
问题可能的解决方案屏幕照明不均匀(一侧屏幕较暗,另一侧较亮)在仪器设置界面中选择更换光立方(ChangeLightCube),重置光立方托盘(第36页).
自动聚焦无法很好地聚焦细胞确保屏幕上没有气泡或碎片干扰自动聚焦,使它难以将样本置于正确的焦平面.
理想情况下,活细胞应中心明亮,死细胞整个细胞区域呈暗色(第44页).
设置标称焦点将提升以后使用时自动聚焦的稳定性.
要设置标称焦点,请参见第44页.
一些细胞在图像上显示但未被计数对于在明场通道中进行的细胞计数和细胞存活率分析,可以调整活细胞和死细胞的大小、亮度和圆度门限值,将所有细胞计数在内(第24页).
对于荧光分析,可以调整全部通道的大小、亮度、圆度和荧光强度门限值,将所有细胞计数在内(第32页).
将所有细胞均计数在内后,您可以收紧计数标准,排除特定大小或亮度的细胞.
当门限值充分最大化后,CSV应为0–60(细胞大小)和0–255(亮度).
图像非常明亮且泛白从资料(Profile)菜单中启用自动光线调整,或降低明场光强度后再计数细胞.
荧光极其明亮且渗入其他滤光片降低荧光光强度后再计数细胞.
Countess检测微珠的浓度不正确微珠很快会沉于管底,这将影响浓度读数.
涡旋混匀微珠30秒,使其重悬,立即加入10μL微珠悬液至10μL台盼蓝中.
上下吹打微珠与台盼蓝的混合物几次,确保充分混匀,立即上样10μL至计数板上.
47问题可能的解决方案同样的细胞样本的计数值有变化如果您是从同样的细胞样本中吸取不同的样本,则差异可能是吸取或混匀造成的.
使用最近校准过的移液器,上下吹打几次确保细胞充分重悬,然后加入台盼蓝.
上下吹打微珠与台盼蓝的混合物几次,确保充分混匀,立即上样10μL至计数板上.
对相同的计数板进行重复计数时计数值有变化如果您确实对同一块计数板进行重复计数,检查图像中的全部细胞是否均已正确计数.
每次插入计数板时,视野可能存在轻微差异.
根据细胞浓度和均匀性不同,当对同一块计数板进行重复计数时,这将造成些许差异,但数值应在10%之内.
计数少量细胞时,少量细胞的视野的轻微改变都会带来较大的影响.
更高浓度的细胞计数的差异性较小.
确保在两次计数之间切勿摇晃或搅拌计数板.
死细胞或计数为死细胞的活细胞的百分比异常高确保细胞正确聚焦,这样活细胞中心明亮,死细胞整个细胞区域呈暗色(参见第44页).
如果细胞未正确聚焦,在屏幕上呈暗色,则CountessIIFL会将其计数为死细胞.
如果细胞正确聚焦,中心明亮,且被计数为死细胞,则确认它们在适当的细胞大小范围内,且尝试调整设置.
如果细胞暴露在台盼蓝下较长时间,则细胞存活率会受到影响,因此每次必须新鲜制备计数板并立即计数,方可获得最佳结果.
使用大小、亮度和圆度滑块排除碎片.
仪器无法识别U盘U盘必须为FAT32格式,方可被仪器识别.
如果不是,则将U盘重新格式化为FAT32(第37页).
尝试使用另一个正确格式的U盘.
无法更新Countess软件确保U盘的格式为FAT32.
如果不是,则将U盘重新格式化为FAT32,然后将文件传送至U盘上进行软件更新.
更新文件必须位于U盘的最上一层,不可放在文件夹或子文件夹内.
文件不得重命名.
文件不得压缩.
文件在传输过程中必须是未被损坏的,且带有.
lft后缀.
如果需要,测试USB鼠标,检查USB接口功能是否正常.
48附录B:产品规格技术规格物理特性仪器类型:台式细胞计数仪与悬浮细胞分析平台仪器尺寸:9(W)*5(D)*9英寸(H)重量:8磅负载功率:最大100–240VAC、0.
58A频率:50/60Hz电输入:12VDC,2A安装位置:仅限室内使用,A级环境(即无残留或轻工业);污染等级:2工作温度:10–40°C工作湿度:<80%(无冷凝)技术规格处理时间:~15秒样本浓度范围:1*104–1*107个细胞/mL颗粒/细胞直径范围:4–60μm(颗粒);7–60μm(细胞)需要样本体积:10μL固件:Countess自动细胞计数平台软件U盘:4GB光学系统光学:3通道(明场和2个EVOSLED光立方插槽)照相机:500万像素,2.
5*光学放大分析计数板材料:聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)尺寸:25mm(W)*75mm(D)*1.
7mm(H)计数池容积:10μL49EVOS光立方LED照明CountessIIFL自动细胞计数仪采用光强度可调节的LED光源,由专利的用户可更换的LED光立方提供(参见下文).
由于LED光源十分靠近物镜,因此可以最大程度减少通道中光学元件的数量.
在较短的通道中实现高强度的照明,可提高荧光基团的激发效率,更好地检测微弱的荧光信号.
EVOS光立方每个用户可更换的自动配置EVOS光立方均包含一个LED、平行光管和滤光片.
除明场通道专门使用台盼蓝进行细胞计数和细胞存活率分析外,CountessIIFL自动细胞计数仪可容纳两个荧光光立方,适用于多种荧光研究应用.
下表列出了ThermoFisherScientific提供的一些常用的荧光和特殊EVOS光立方.
如需完整列表,请登录www.
thermofisher.
com/evoslightcubes或联系技术支持(参见第63页).
如需了解更换LED光立方的说明,请参见第40页.
光立方染料DAPIDAPI,Hoechst,BFPTagBFPTagBFPCFPECFP,LuciferYellow,EvansBlueGFPGFP,AlexaFluor488,SYBRGreen,FITCYFPEYFP,吖啶橙+DNARFPRFP,AlexaFluor546,AlexaFluor555,AlexaFluor568,Cy3,MitoTrackerOrange,RhodamineRed,DsRedTexasRedTexasRed,AlexaFluor568,AlexaFluor594,MitoTrackerRed,mCherry,Cy3.
5Cy5Cy5,AlexaFluor647,AlexaFluor660,DRAQ5Cy5.
5Cy5.
5,AlexaFluor660,AlexaFluor680,AlexaFluor700Cy7Cy7,IRDye800CW注:EVOS光立方仅适用于CountessIIFL自动细胞计数仪.
CountessII自动细胞计数仪仅使用明场照明,不支持EVOS光立方.
50附录C:订购信息CountessIIFL自动细胞计数仪及ThermoFisherScientific可提供下列CountessIIFL仪器和仪器.
如需了解更多信息,请登录www.
thermofisher.
com或联系技术支持(第63页).
产品规格货号CountessIIFL自动细胞计数仪各1个AMQAF1000CountessII四芯电源线各1根AMEP4716CountessIIU盘各1个A25751CountessIIFL光立方拆卸工具各1个AMEP4747CountessIIFL一次性计数板支架各1个AMEP4745CountessIIFL可重复使用的计数板支架各1个AMEP4746下列产品可用于CountessIIFL自动细胞计数仪,并可由ThermoFisherScientific单独供应.
如需了解更多信息,请登录www.
thermofisher.
com或联系技术支持(第63页).
产品规格货号Countess细胞计数板,50块(100次计数)1盒*C10228Countess细胞计数板,500块(1000次计数)10盒*C10312Countess细胞计数板,1250块(2500次计数)25盒*C10313Countess细胞计数板,2500块(5000次计数)50盒*C10314Countess细胞计数板,5000块(10,000次计数)100盒*C10315CountessIIFL可重复使用的计数板各1块A25750Countess检测微珠(1x106个微珠/mL)1mLC10284台盼蓝染料(0.
4%)2*1mLT10282*每盒Countess细胞计数板包括50块计数板和2*1mL管台盼蓝(0.
4%),足够100次计数使用.
51附录D:CSV文件格式CSV文件格式,解释概述逗号分隔型取值(CSV)文件以纯文本形式保存表格形式的数据(数字和文字).
纯文本表示文件是字符序列,没有二进制数数据.
CSV文件可以使用任何第三方软件或电子制表程序打开.
下表介绍了CountessII数据保存为CSV文件的类别,并使用电子制表程序打开.
类别栏名称说明一般A数字连续样本运行数B文件名称文件的名称C日期和时间样本运行的日期和时间D模式BF-明场或FL-荧光台盼蓝/明场E总浓度整个样本的浓度F计数的总细胞样本中计数的总细胞数G活细胞浓度样本中活细胞部分的浓度H计数的活细胞计数的活细胞总数I死细胞浓度样本中死细胞部分的浓度J计数的死细胞计数的死细胞总数K存活率(%)基于台盼蓝染色的样本存活率百分比L平均大小(um)平均细胞大小(微米)荧光M光立方1的名称第一位置(顶)上的EVOS光立方名称N光立方1的浓度第一光立方位置中发出荧光的细胞浓度O光立方1(%)明场中的第一光立方位置发出荧光的总细胞百分比P光立方1的计数细胞第一光立方位置计数的总细胞数Q光立方2的名称第二位置(底)上的EVOS光立方名称R光立方2的浓度第二光立方位置中发出荧光的细胞浓度S光立方2(%)明场中的第二光立方位置发出荧光的总细胞百分比T光立方2的计数细胞第二光立方位置计数的总细胞数U光立方1+2的浓度第一和第二光立方位置中发出荧光的细胞浓度V光立方1+2(%)明场中的第一和第二光立方位置发出荧光的总细胞百分比W光立方1+2的计数细胞第一和第二光立方位置计数的总细胞数52类别栏名称说明一般详情X焦距值焦点位置数值YBF光强度明场光强度值(0-100%)台盼蓝/明场计数参数Z活细胞的最小尺寸活细胞的最小尺寸(微米)AA活细胞的最大尺寸活细胞的最大尺寸(微米)AB活细胞的最小亮度活细胞调整滑块的最小亮度值AC活细胞的最大亮度活细胞调整滑块的最大亮度值AD活细胞的圆度活细胞调整滑块的圆度值AE死细胞的最小尺寸死细胞的最小尺寸(微米)AF死细胞的最大尺寸死细胞的最大尺寸(微米)AG死细胞的最小亮度死细胞调整滑块的最小亮度值AH死细胞的最大亮度死细胞调整滑块的最大亮度值AI死细胞的圆度死细胞调整滑块的圆度值荧光计数参数AJ光立方1的光强度第一位置(顶)光立方光强度值(0-100%)AK光立方2的光强度第二位置(底)光立方光强度值(0-100%)ALBF最小尺寸"明场"细胞的最小尺寸(微米)AMBF最大尺寸"明场"细胞的最大尺寸(微米)ANBF最小亮度"明场"调整滑块的最小亮度值AOBF最大亮度"明场"调整滑块的最大亮度值APBF圆度"明场"调整滑块的圆度值AQ光立方1的最小亮度第一位置(顶)光立方调整滑块的最小亮度值AR光立方1的最大亮度第一位置(顶)光立方调整滑块的最大亮度值AS光立方2的最小亮度第二位置(底)光立方调整滑块的最小亮度值AT光立方2的最大亮度第二位置(底)光立方调整滑块的最大亮度值53附录E:安全性本文中使用的安全性惯例安全性警示文字本文包括四种安全性警示文字,出现在需提醒用户注意相应危险的位置.
每种警示文字——切记、注意、警告、危险——表示需遵守要求或采取行动的特定级别:切记!
——提供正确操作仪器、准确安装或安全使用某化学品所必须的信息.
注意!
——表示潜在的危险状况,如果不加以避免,则可能导致轻微或中度伤害.
它也用于警示避免不安全的操作.
警告!
——表示存在潜在的危险状况,如果不加以避免,则可能导致死亡或严重人身伤害.
危险!
——表示存在紧迫的危险状况,如果不加以避免,则可能导致死亡或严重人身伤害.
此类文字仅限用于极端危险的情况.
除"切记!
"警示外,本文中的每种安全性警示文字都伴有一个三角形危险警告,内含一个危险符号.
这些危险符号与仪器上附带的危险符号相同(参见"安全性符号").
54仪器上的符号电气符号下表列出了可能显示的电气符号.
符号说明表示主电源开关处于打开(On)位置.
表示主电源开关处于关闭(Off)位置.
表示待命开关,通过此开关可将仪器切换到待用(Standby)状态.
若此开关处于待命状态则可能存在危险电压.
表示按压伸缩式主电源开关的打开/关闭(On/Off)位置.
表示可连接到另一仪器的信号地标的端子.
这并不是受保护的接地端子.
表示保护性的接地端子,在对仪器进行任何电气连接之前,必须先将此类端子正确接地.
表示可以接受或供应交流电流或电压的端子.
表示可以接受或供应交流或直流电流或电压的端子55安全性符号下表列出了可能显示的安全性符号.
每种符号可能单独出现,也可能伴随有文字说明,用来解释相关的危险情况(参见"仪器上的安全性标签").
这些安全性符号也可能出现在本文及其他产品支持文件中"危险"、"警告"和"注意"警示文字的旁边.
符号说明表示应查阅手册,以获取进一步信息,并应按相应的注意事项操作.
表示存在电击危险,应按相应的注意事项操作.
表示存在灼热表面或其他高温危险,应按相应的注意事项操作.
表示仪器内存在激光,应按相应的注意事项操作.
表示存在活动性部件,应按相应的注意事项操作.
表示存在生物危害物,应按相应的注意事项操作.
表示存在紫外光,应按相应的注意事项操作.
环保符号下列符号适用于2005年8月13日之后投入欧洲市场的所有ThermoFisherScientific电气和电子产品.
符号说明本产品不得作为未分类市政废物处置和废弃.
请按照当地市政废物的处理规定妥善废弃,以减小电子电气产品废弃物(WEEE)对环境的影响.
欧盟客户:有关设备收集和再利用事宜,请致电您的客户服务代表.
请登录www.
thermofisher.
com,获取在欧盟国家的客户服务办事处列表.
56仪器上的安全性标签以下"注意"、"警告"和"危险"声明可能会出现在ThermoFisherScientific仪器上,并伴有前文介绍的安全性符号.
危险符号中文English注意!
危险化学品.
操作之前,请阅读安全性数据表(SDS).
CAUTION!
Hazardouschemicals.
ReadtheSafetyDataSheets(SDSs)beforehandling.
注意!
危险废物.
在操作及废弃时,请参阅SDS及当地法规.
CAUTION!
Hazardouswaste.
RefertoSDS(s)andlocalregulationsforhandlinganddisposal.
危险!
高压.
DANGER!
Highvoltage.
警告!
为避免电击,切勿移去需使用工具方可拆下的防护盖.
仪器内部为非用户可维护的部件.
应由ThermoFisherScientific合格的维护人员进行维修.
WARNING!
Toreducethechanceofelectricalshock,donotremovecoversthatrequiretoolaccess.
Nouser-serviceablepartsareinside.
ReferservicingtoThermoFisherScientificqualifiedservicepersonnel.
危险!
打开时可能存在3B类可见和/或不可见激光辐射.
避免光束照射.
DANGER!
Class3Bvisibleand/orinvisiblelaserradiationpresentwhenopen.
Avoidexposuretobeam.
注意!
活动性部件.
有挤压危险.
CAUTION!
Movingparts.
Crush/pinchhazard.
57仪器的一般安全性警告!
人身伤害危险.
请严格按照本文中说明的方法使用此产品.
若未按ThermoFisherScientific说明的方法使用本仪器,则可能导致人身伤害或对仪器造成损坏.
操作仪器确保操作本仪器的任何人员均具备以下条件:已接受过实验室一般安全性操作规程和本仪器的具体安全性操作规程的培训与指导.
已阅读并理解所有适用的安全性数据表(SDS).
参见"文件与支持"(第63页).
安全预防措施请勿将仪器安装于高湿度环境下(例如温室或孵箱),以免发生电击危险.
如果水或其他物质进入仪器、适配器或电源插座中,应立即切断电源线并与服务人员联系.
有关操作环境的信息,请参见"操作环境"(第8页).
请勿用湿手按压主插头或电源线.
请始终确保电源输入电压与您所在地提供的电压相匹配.
请勿将仪器安装在斜面或易发生震动的地方,以免导致仪器出现故障或造成损坏.
请勿将任何物体插入仪器的通气孔内,以免导致电击、人身伤害及设备损坏.
将电源线牢固地插在壁装电源插座和仪器上.
为避免潜在的电击危险,请确保电源线适当地接地.
确保设备安放位置合适,以方便切断仪器电源.
在拔掉电源线并/或移动仪器前,请先关闭仪器.
如果仪器损坏或掉落,请切断电源线并与服务人员联系.
请勿擅自拆卸本仪器.
仅可使用授权(适配器、电源线和U盘).
如果仪器发出烟雾,请将电源线从壁装电源插座中拔出,并与服务人员联系.
清洁或去除仪器污染注意!
采用非制造商推荐的清洁或去污染方法,可能会影响仪器安全或质量.
拆卸仪器外壳或部件注意!
人身伤害危险.
本仪器只能由用户指南中所规定的受过培训的专业人员或代理机构指派的合格人员提供服务.
58化学品安全性化学品危险警告警告!
化学品危险.
在操作任何化学品之前,请参阅制造商提供的安全性数据表(SDS),并遵守所有相关注意事项.
警告!
危险化学品存放.
切勿使用玻璃容器收集或存放废物,以防造成玻璃破裂或破碎.
试剂和废物瓶可能会破碎和泄漏.
每只废物瓶都应装在低密度聚乙烯安全容器内,并封紧封盖,而且手柄应锁定在朝上的位置.
在操作试剂和废物瓶时,应穿戴合适的保护眼镜、防护服和手套.
安全性的一般指导原则欲最大限度降低化学品危险性:在存放、操作或使用任何化学品或危险材料之前,请阅读并理解由化学品制造商提供的安全性数据表(SDS).
尽量避免接触到化学品.
在操作化学品时,应穿戴适当的人身防护品(例如,安全防护眼镜、手套或防护服).
关详细的安全性指南,请参阅SDS.
尽量将吸入化学品的危险性降至最低.
切勿敞开放置化学品的容器.
仅在通风良好的环境中使用化学品(例如,通风橱).
有关详细的安全性指南,请参阅SDS.
定期检查化学品有无泄漏或溅溢.
如果发生化学品泄漏或溅溢,请按照制造商在SDS中建议的清洁方法清洁.
遵守所有当地、本省/州和本国有关化学品存放、操作和废弃的法律及规章要求.
59化学品废物安全性化学品废物危险注意!
危险废物.
在处理及废弃废物时,请参阅安全性数据表(SDS)及当地有关法规的要求.
化学品废物安全性指南欲最大限度地降低化学品废物的危险性:在存放、操作或废弃化学品废物之前,请阅读并理解废物容器中由化学品制造商提供的安全性数据表(SDS).
提供存放废物的主容器和辅助容器.
(主容器用于存放直接产生的废物.
辅助容器用于存放从主容器中溅溢或泄漏的废物.
两个容器都必须与废物材料的化学特性相容,而且必须符合本国、本省/州及当地有关废物存放的法规要求.
)尽量避免接触到化学品.
在操作化学品时,应穿戴适当的人身防护品(例如,安全防护眼镜、手套或防护服).
有关详细的安全性指南,请参阅SDS.
尽量将吸入化学品的危险性降至最低.
切勿敞开放置化学品的容器.
仅在通风良好的环境中使用化学品(例如,通风橱).
有关详细的安全性指南,请参阅SDS.
在通风橱中操作化学品废物.
将废物容器倒空后,使用附带的封盖将容器密封好.
应按照良好实验室操作规程并遵守当地、本省/州和本国有关环保和健康法规要求废弃废物托盘和废物瓶中的废物.
废弃废物如果在操作仪器时会产生具有潜在危险性的废物,则必须:按实验室使用的特定用途、试剂和底物确定废物的性质(必要时进行分析).
确保实验室中所有工作人员的健康和安全.
确保按照当地、本省/州和/或本国的有关法规,存放、传输、运送和废弃仪器废物.
切记!
放射性或生物危害性材料可能需要采取特别的方法操作,并可能要遵循废弃规定.
60电气安全性危险!
电击危险.
在操作CountessIIFL自动细胞计数仪时未安放仪器面板会导致严重的电击.
切勿拆下仪器面板.
拆下仪器面板会暴露高电压触点.
保险丝警告!
火灾危险.
为继续防止火灾,更换保险丝时请使用为仪器规定的正确类型和额定值的保险丝.
电力危险!
电气危险.
接地电路的连续性对于仪器的安全操作至关重要.
接地导线断开时,切勿操作仪器.
危险!
电气危险.
使用为所在机构供电电压而设置和批准的电缆.
危险!
电气危险.
将系统插入具有适当电流且正确接地的插座内.
过电压额定值CountessIIFL自动细胞计数仪的安装(过电压)类别为II类,属于便携式仪器.
61生物危害安全性警告!
生物危害.
生物样本(如人和其他动物的组织、体液和血液等样本)均具有传播传染疾病的潜在危险性.
应遵守所有适用的当地、本省/州和/或本国相关法规.
穿戴合适的保护眼镜、防护服和手套.
认真阅读并遵守以下出版物中的有关指南.
WARNING!
BIOHAZARD.
Biologicalsamplessuchastissues,bodyfluids,andbloodofhumansandotheranimalshavethepotentialtotransmitinfectiousdiseases.
Followallapplicablelocal,state/provincial,and/ornationalregulations.
Wearappropriateprotectiveeyewear,clothing,andgloves.
Readandfollowtheguidelinesinthesepublications.
美国境内:美国健康和人类服务部指南,见BiosafetyinMicrobiologicalandBiomedicalLaboratories(微生物和生物医学实验室生物安全)(文件号:017-040-00547-4;www.
cdc.
gov/OD/ohs/biosfty/bmbl4/bmbl4toc.
htm)OccupationalSafetyandHealthStandards,BloodbornePathogens(血源性病原体的职业安全和健康标准)(29CFR§1910.
1030;www.
access.
gpo.
gov/nara/cfr/waisidx_01/29cfr1910a_01.
html)所在公司/机构有关使用/操作潜在传染性物质的生物安全计划方案.
有关预防生物危害的更多说明与指导,请访问以下网站查阅:www.
cdc.
gov欧洲境内:请参阅当地的生物危害指南和法规与生物安全注意事项,以及世界卫生组织(WHO)在LaboratoryBiosafetyManual(实验室生物安全手册)第3版中规定的操作规范www.
who.
int/csr/resources/publications/biosafety/WHO_CDS_CSR_LYO_2004_11/en/62安全性和电磁兼容性(EMC)标准本节提供以下信息:美国和加拿大安全性标准欧洲安全性和EMC标准澳大利亚EMC标准美国和加拿大安全性标准CSAC/US标志代表本产品符合美国和加拿大的相关标准,包括CSA、CSAAmerica、ANSI、ASME、ASSE、ASTM、NSF和UL的标准.
欧洲安全性和EMC标准CE标志代表本产品符合该标识所需的所有欧盟相关规定.
必须按照本手册所述的条件操作仪器.
如未按ThermoFisherScientific指定的方式使用本仪器,则可能损害仪器提供的防护.
澳大利亚EMC标准C-Tick标志表示产品符合澳大利亚和新西兰的电磁兼容性标准.
63文件与支持获取支持技术支持请登录www.
thermofisher.
com/support了解最新的服务和支持,包括:全球各地的联系电话产品支持,包括:产品常见问题(FAQ)软件、补丁和更新订购和网络支持产品文件,包括:用户指南、手册和实验方案分析证明安全性数据表(SDS;又称为MSDS)注:对于其他制造商的试剂和化学品SDS,请联系制造商.
有限产品质保LifeTechnologies公司及/或其附属公司为其产品提供保证,请登录LifeTechnologies的网站www.
lifetechnologies.
com/termsandconditions,了解LifeTechnologies的一般销售条款和细则文本.
如有任何疑问,请登录www.
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com/support,联系LifeTechnologies.
64如需支持请登录thermofisher.
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com2015年9月1日